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pxhcooh

金虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 969.4
帖子: 309
在线: 98.4小时
虫号: 764414

[交流] 【求助/交流】wb时β-actin加完发光液不发光？

是不是二抗滴度太低啊，压片时间10min才出来条带...

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1楼2011-04-14 09:02:06

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tongjinjin

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 9.8小时
虫号: 968133

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+6): Good！继续加油哦！ 2011-05-03 00:37:36

您好，我最近也一直在做WB,β-actin一开始也不出，不过前几天终于出了。我自己总结了一下，第一，上样的蛋白浓度一定要够，例如我就是六孔板细胞，三个孔提一管蛋白，而且超声煮沸的时间一定要足够，一般超声30分钟，煮沸十分钟才上样。第二，抗体浓度，适当加大一抗浓度，有的用到1:200。二抗1:2000.。如果这样条件整张膜都亮，在适当降低二抗浓度。第三，转膜的时候，一定掌握好时间，别转过了。第四，不要气馁，再接再厉~祝你成功。个人拙见，仅供参考