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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于co-expression中终止密码子得问题
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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于co-expression中终止密码子得问题 已有2人参与

大家好，
最近想尝试把两个酶蛋白的基因克隆一个表达载体中，请问如果两个基因顺序排列，那第一个基因的终止密码子需要吗？若没有终止密码子，表达的蛋白会不会两种基因连在一起的蛋白；若加终止密码子，后面的蛋白会不会不表达？谢谢
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1楼 2011-04-13 09:49:21
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+4): good 2011-04-13 10:28:50
引用回帖:
Originally posted by clf0803 at 2011-04-13 09:49:21:
大家好，
最近想尝试把两个酶蛋白的基因克隆一个表达载体中，请问如果两个基因顺序排列，那第一个基因的终止密码子需要吗？若没有终止密码子，表达的蛋白会不会两种基因连在一起的蛋白；若加终止密码子，后面的蛋 ...

需要的，如果没有第一个终止密码子，表达出来的是融合蛋白，不是两个单独的酶蛋白。加终止密码子不会影响后面基因的表达的，最好在第二个基因前加上一个RBS，第一个基因用载体上RBS，不需要加的。分子生物学书上翻译的机制你好好看看就清楚了。另外，也有把第一个终止密码子删除的，其目的是做两个蛋白的融合，其目的和你的不一样，是希望得到特殊性质的融合蛋白。

[ Last edited by lxj341401 on 2011-4-13 at 10:46 ]
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2楼2011-04-13 09:54:33
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1，第一个基因肯定要加终止密码子的，不然表达出来肯定不是你要的东西。
2，想要两个基因能同时表达，最好在第二个基因前面加上一个启动子，具体方法是，将第二个基因单独构建一个表达载体，以这个表达载体为模板，然后同时扩增启动子和基因，连在第一个基因后面。
或者是至少在两个基因前面加上一个RBS，具体方法就比较简单，在扩增第二个基因时，在上游引物5端加上个RBS序列就行了。不过表达起来肯定没有单独的启动子启动效果好。
3，多基因的表达，现在又很多商业性的载体都带双MCS了。比如Novagen公司的pACYCDuet-1,pCOLADuet-1
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Thank-you，so-blue.
3楼2011-04-13 10:29:27
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