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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】诚心请教一个关于拟南芥突变体鉴定的问题
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liucaifeng

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】诚心请教一个关于拟南芥突变体鉴定的问题已有8人参与

订的SALK库的拟南芥T-DNA插入突变体，DNA水平鉴定有纯合子，但RNA水平鉴定目的基因却仍能表达，几个Line 都是这样，快郁闷了。不知道大家有碰到过类似情况，可能是什么愿意导致的呢？
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1楼2011-04-07 20:36:30
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叶寻

捐助贵宾 (初入文坛)
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jhu132llh(金币+5): 首贴奖励 2011-11-01 15:27:56
不知道楼主的问题解决了没有，我最近也被这个问题困扰了。我的突变体T-DNA插入在启动子后，基因的mRNA一共800多bp，我设计的引物也跨越了T-DNA插入区域，扩增了475bp的片段，结果突变体的CDNA还是能扩出来被插入的基因……不知道接下来该怎么办呀
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6楼2011-10-30 23:36:21
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咸鱼

金虫 (小有名气)
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Originally posted by liucaifeng at 2011-04-07 20:36:30:
订的SALK库的拟南芥T-DNA插入突变体，DNA水平鉴定有纯合子，但RNA水平鉴定目的基因却仍能表达，几个Line 都是这样，快郁闷了。不知道大家有碰到过类似情况，可能是什么愿意导致的呢？

RNA水平鉴定就是做RT或者NOrthern吧，这样的话你选择做PCR的那一段引物或Northern的那一段探针是T-DNA插入之前还是之后的序列？
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2楼2011-04-10 13:06:53
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liucaifeng

金虫 (小有名气)
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Originally posted by 咸鱼 at 2011-04-10 13:06:53:
RNA水平鉴定就是做RT或者NOrthern吧，这样的话你选择做PCR的那一段引物或Northern的那一段探针是T-DNA插入之前还是之后的序列？

做RT，PCR引物设计的还是跨T-DNA的，按理说不该P出来的，可就是能P吃条带来，测序结果也表明的确是目的条带
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3楼2011-04-11 10:11:45
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咸鱼

金虫 (小有名气)
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Originally posted by liucaifeng at 2011-04-11 10:11:45:
做RT，PCR引物设计的还是跨T-DNA的，按理说不该P出来的，可就是能P吃条带来，测序结果也表明的确是目的条带

那是不是DNA检测出了什么差错？
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4楼2011-04-12 19:52:25
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