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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】几个关于实时定量PCR的问题
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-06 19:46:07
引用回帖:
Originally posted by nininini at 2011-04-06 19:21:37:
谢谢，回复的很详细~~
但是我还是有一些疑问: 质粒为模板优化的条件与以cDNA为模板的扩增条件能保持一致吗？另外，如果是引物二聚体而不是非特异性扩增的话会影响我的实时定量结果吗？
谢谢~~

差别不大，最关键的是cDNA要做反转录，反转录酶很贵啊……所以一般都用质粒优化。
如果用的是sybr green一类的荧光染料，引物二聚体会影响荧光定量PCR的结果的。sybr green可以非特异地和双链DNA结合，不管是目的产物、引物二聚体还是非特异产物，都可以产生荧光信号，而仪器是不能区分它们的信号的，所以引物二聚体和非特异产物会干扰定量结果。
可以试着提高退火温度，看看能不能减少引物二聚体。有没有二聚体就看融解曲线好了，跑胶的话，看不出是残余的引物还是引物二聚体。
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5楼2011-04-06 19:32:57
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