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xiongba管理员
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[交流]
【求助/交流】ELISA板的前处理
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各位大侠： 小弟我是刚刚接触ELISA，目前正在做二抗包被条件的摸索研究。我想问一下，在抗体包被前的空ELISA板需不需要处理啊？比如说活化啊，什么的？另外，我做了几次（没有做什么前处理，只是用纯水洗了洗）结果怎么都不是太好啊？……一下是我的实验原理及大概操作，请各位大侠指教！小弟不胜感激…… 原理：先用二抗包被载体，然后是一抗和结合蛋白与二抗竞争性结合，再次是加HRP最后加TMB底物显色，盐酸终止反应。（其主要目的是通过一抗与二抗结合而是其能更加充分的抗原结合） 我的主要任务是摸索二抗的包被浓度，经过几次实验，我选定的是1ng/ml的二抗浓度包被，用10%的小牛血清封闭。之后就是常规的ELISA的操作了。。可是为什么我做的几次结果都不是太好呢？！一是没有平行，二是我用不同浓度梯度的一抗来测定，结果测得的OD值一点规律都没有！我真的很无语啊……请各位大侠帮帮忙吧！小弟再次拜谢！~ |
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