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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！ 已有23人参与

怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！
我是从青霉菌里提的，开始用的SDS法，液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后，12000离心10min，加两次氯仿：异戊醇（24：1）后离心10Min,12000收集上清，加等体积异丙醇-20放置30min以上，13500离心，用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的，结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法，（液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄，50℃，1h）做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了，结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下！！！

[ Last edited by 1949stone on 2011-4-21 at 12:54 ]
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1楼 2011-03-28 18:52:28
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专家顾问 (知名作家)

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西瓜(金币+2): 热心 2011-04-20 23:10:34
液氮研磨之前菌丝体越干越好，干的才能磨成粉末，湿的加了液氮之后会成一块贴着研钵，不过我很少通过真空干燥弄干菌丝，每次都是挤得差不多就行了，都是成一块贴着研钵的，但是很少有一次提不出来的。我加了提取液到磨完菌丝的研钵里之后还用研棒把菌丝洗下来，吸取到EP管里之后不离心，直接抽提。我不知道是否应该离心之后取上清液抽提，没做过对比实验，不知道是否有差别，反正已经能提取出来，就不费那个心了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
26楼2011-04-17 16:58:22
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
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1949stone(金币+1): 有理 2011-04-21 12:53:50
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2楼2011-03-28 20:00:30
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河外生命

木虫 (小有名气)
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1949stone(金币+1): 支持楼上 2011-04-21 12:54:04
说下实验细节，好让大家帮你分析
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事在人为
3楼2011-03-28 21:39:19
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 鬼笔坏坏 at 2011-03-28 18:52:28:

回复：我是从青霉菌里提的，开始用的SDS法，液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后，12000离心10min，加两次氯仿：异戊醇（24：1）后离心10Min,12000收集上清，加等体积异丙醇-20放置30min以上，13500离心，用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的，结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法，（液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄，50℃，1h）做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了，结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下！！！
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4楼2011-03-29 09:12:05
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