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kakaqa

铜虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】请问原位杂交一般采用多少温度

小弟最近一直在做原位杂交,第一次可能是由于探针不太亮没有做出来,杂交温度是48度;第二次重新合成了探针,杂交温度采用的是46度,又没杂出来,师兄说杂交所用试剂应该用DEPC水配,现在重新将试剂用DEPC水配了,但是查有关资料都说原位杂交温度在50-65度之间,可师兄说48度就行了,现在很纠结,不知道哪个是对的,说一下小弟是做的线虫的一个基因的原位杂交。我现在真的做怕了,有哪位大侠对原位杂交有独特的见解的,请指教一下,小弟感激不已!
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)



kakaqa(金币+2):谢谢参与
建议用温和碱性水解后的探针(100-150bp),杂交温度42度即可。如果背景噪音高,可将杂交温度提高至50度。我们就是这么做的(植物mRNA原位杂交)。我想,动物应该更容易做。
10楼2011-10-10 10:52:52
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kakaqa

铜虫 (初入文坛)


不是吧你们,给点意见啊啊啊啊!!!
5楼2011-03-28 10:13:53
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zxzbl

木虫 (著名写手)



kakaqa(金币+2):谢谢参与
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7楼2011-03-28 11:01:17
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kakaqa(金币+2):谢谢参与
试试50度吧
实验都是一步步优化出来的
8楼2011-03-28 11:20:26
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简单回复
2011-03-28 10:56   回复  
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