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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】请问原位杂交一般采用多少温度
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kakaqa

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请问原位杂交一般采用多少温度

小弟最近一直在做原位杂交，第一次可能是由于探针不太亮没有做出来，杂交温度是48度；第二次重新合成了探针，杂交温度采用的是46度，又没杂出来，师兄说杂交所用试剂应该用DEPC水配，现在重新将试剂用DEPC水配了，但是查有关资料都说原位杂交温度在50-65度之间，可师兄说48度就行了，现在很纠结，不知道哪个是对的，说一下小弟是做的线虫的一个基因的原位杂交。我现在真的做怕了，有哪位大侠对原位杂交有独特的见解的，请指教一下，小弟感激不已！
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1楼2011-03-28 09:54:29
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
kakaqa(金币+2):谢谢参与
建议用温和碱性水解后的探针（100-150bp）,杂交温度42度即可。如果背景噪音高，可将杂交温度提高至50度。我们就是这么做的（植物mRNA原位杂交）。我想，动物应该更容易做。
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10楼2011-10-10 10:52:52
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kakaqa

铜虫 (初入文坛)
不是吧你们，给点意见啊啊啊啊！！！
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5楼2011-03-28 10:13:53
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zxzbl

木虫 (著名写手)
★
kakaqa(金币+2):谢谢参与
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7楼2011-03-28 11:01:17
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★
kakaqa(金币+2):谢谢参与
试试50度吧
实验都是一步步优化出来的
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8楼2011-03-28 11:20:26
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甘雕岅珠6楼
2011-03-28 10:56   回复  
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