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【求助/交流】DNA纯化问题，求教师兄师姐 已有1人参与
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我用CTAB法粗提DNA。而后用乙醇沉淀法纯化。纯化后测纯度，得结果是：A260/A280=1.84，A260/A230=1.86.各位师兄师姐还能帮忙分析一下实验结果？应该如何改进？ 因为做到后来我拿PCR产物直接测序时发现总出问题，在排除了PCR本身的问题后，初步猜测应该是模板不纯的原因。请问应该如何改进纯化步骤才能使A260/A230=2呢？ 本人刚开始做实验，经验不足，还请各位师兄师姐多多指教！ |
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PCR产物测序是什么问题？有没有从反向再测一下呢？ 我个人觉得如果你直接送PCR产物去测序又总出问题的话，建议你将PCR产物克隆到载体上后再挑单克隆去测序，应该就好了。PCR产物直接测序是会出现一些问题的，比如出现双峰什么的。 如果你成功扩增出大小和预期一样的单一清晰PCR条带（产量够，不弥散），可以从胶上把目的条带切下来，然后提取PCR产物，送去测序，另外同意楼上意 见，建议一端测序出问题以后可以反向换引物测下，如果实在不行再做克隆，毕竟比较费时间。我从胶上纯出来的PCR产物，用的QIAGEN 试剂盒，大小约为300-400bp, 成功测出过几百个样本，大多数都没问题。 |
2楼2011-03-22 09:11:15