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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】安捷伦液相压力问题
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布丁3835

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】安捷伦液相压力问题

各位，本人正用安捷伦1200做一个酯类化药的分析，色谱柱：150mm*4.6mm，5um粒径，流动相A：1.3g磷酸氢二铵，4.0g四丁基氢氧化铵溶于900ml水中，用磷酸调pH值为7.5，用的是娃哈哈小瓶纯净水。流动相B为醇甲醇，两者走梯度。泵压力非常不稳定，见下图。流动相过滤后充分脱气。之前也跟安捷伦工程师沟通过，问题没得到解决，现在不知道问题出在哪里，如果有人遇到了类似的问题，或者有什么建议的话，欢迎指导，谢谢。
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1楼 2011-03-17 16:35:22
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年年有余

铁杆木虫 (著名写手)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
为什么会有两个尖尖的峰，你问过么？
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2楼2011-03-17 16:43:54
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双子座的我A

木虫 (著名写手)
★ ★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
novus(金币+1): 谢谢交流，欢迎常来药学版！ 如果是流动相过滤头产生的气泡的话，在管路里面是可以看到的哦！ 2011-03-17 18:47:15
你可以把吸流动相的头用30%的硝酸或50%甲醇超声一下，然后把流动相超声5~30min，试一下~
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3楼2011-03-17 16:46:31
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longtao7437

金虫 (初入文坛)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
额，没遇到过哎～帮你顶下！！
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4楼2011-03-17 16:46:45
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gdflly08

木虫 (文坛精英)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
是不是样品处理的问题？
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5楼2011-03-17 16:47:37
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cjl2fl

金虫 (正式写手)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
我觉得是流动相的问题，可能要调整一下的。
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7楼2011-03-17 18:52:20
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novus

铁杆木虫 (著名写手)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
建议楼主采取排除法来解决问题：
首先换纯水纯甲醇的流动相体系，将A通道用纯水清洗干净后，再走这个梯度，如果没有气泡说明不是仪器有问题，相反可能是仪器有问题了；
如果确认仪器米有问题，再将流动相A缓冲液跟甲醇等比例混合看看是否有结晶析出来或者产生大量气泡，甲醇跟水混合会放热，不知道对你这个流动相体系是否有影响？
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8楼2011-03-17 19:00:50
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Best538

木虫 (小有名气)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
如果能贴上方法的timetable，把纵坐标调成压力单位就更好了
分段排除吧，先卸掉柱子，分别用你的两种流动相跑一下，没问题的话按你的方法跑一针，看看是不是还是会出现压力不稳。
如果还是不稳，再去考虑流动相的问题，比如气泡，比如混合产热。更换流动相为纯甲醇和纯水，分别100%跑一下，然后互换再跑一下。
还是有问题的话就要怀疑是泵的问题了
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9楼2011-03-17 19:26:10
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布丁3835

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 双子座的我A at 2011-03-17 16:46:31:
你可以把吸流动相的头用30%的硝酸或50%甲醇超声一下，然后把流动相超声5~30min，试一下~

我们用的是玻璃的滤头，培训的时候老师说千万不能超，否则就报废了
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10楼2011-03-17 21:49:11
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布丁3835

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by novus at 2011-03-17 19:00:50:
建议楼主采取排除法来解决问题：
首先换纯水纯甲醇的流动相体系，将A通道用纯水清洗干净后，再走这个梯度，如果没有气泡说明不是仪器有问题，相反可能是仪器有问题了；
如果确认仪器米有问题，再将流动相A缓冲液 ...

我们之前试过了用纯水和纯甲醇走相同的梯度，压力正常，安捷伦的工程师也排除了仪器的问题。梯度开始时是40%的缓冲盐，保持5min，后缓冲盐慢慢将到10%。不过将缓冲盐和甲醇等体积混合倒是没观察过有没有盐析出，虽然甲醇和水混合会放热，还产生很多气泡，但是没有办法，这个是药典上的方法，再说不加缓冲盐，甲醇和水混合液会有放热和产生气泡，但是系统压力是正常的。谢谢你的建议
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11楼2011-03-17 21:56:17
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novus

铁杆木虫 (著名写手)
★
karl2100(金币+1): 谢谢！ 2011-03-19 12:29:40
我见过的甲醇跟水少量混合时产生的气泡很少的几乎难发现，偶是担心会不会因为放热导致流动相中添加的氨类大量挥发，当然这种可能性可不太大。

如果实在影响分析结果的话还是改方法吧，只要你自己建立的方法比药典方法有优势，验证通过就可以的。

[ Last edited by novus on 2011-3-21 at 17:13 ]
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12楼2011-03-19 11:08:28
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seo_0401

铁杆木虫 (正式写手)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
看看是不是单向阀的问题 拿下来用甲醇或异丙醇超声。。。
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13楼2011-03-21 10:11:07
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Renr

铁杆木虫 (知名作家)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
肯能有气泡进去了
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14楼2011-03-21 10:31:16
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zgf340631735

至尊木虫 (文坛精英)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
肯定是流动相的问题。
既然脱过气了。做一下流动相两相的相容性试验。取流动相比例的体积将两相混合，放置，振摇看看是否有晶体析出。
注意温度的影响（室温）。可以降温试试看看会不会析晶。
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15楼2011-03-22 16:55:46
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psj

铜虫 (小有名气)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by 布丁3835 at 2011-03-17 16:35:22:
各位，本人正用安捷伦1200做一个酯类化药的分析，色谱柱：150mm*4.6mm，5um粒径，流动相A：1.3g磷酸氢二铵，4.0g四丁基氢氧化铵溶于900ml水中，用磷酸调pH值为7.5，用的是娃哈哈小瓶纯净水。流动相B为醇甲醇，两者 ...

是基线吗？柱子是C8还是C18？ 梯度洗脱过程中流动相离子强度变化对流动相粘度影响较大，尤其是反相柱子上表现出的压力波动很大。可以适当提高柱温箱温度，或用粒径粗些的填料柱子试试。
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20楼2011-03-22 18:32:00
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shangxiaona

新虫 (小有名气)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
有可能是管路里进空气了
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21楼2011-03-22 20:46:55
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
跑纯水或纯甲醇压力稳么？
如果不稳，估计就是流路污染或者某些配件污染了。
这种情况，可以用5%稀硝酸或异丙醇清洗一下流路看看。
配件清洗的话，额，安捷伦不像岛津，安捷伦的比较难卸下来清洗，安捷伦工程师一般也不同意自己卸下来清洗的。
如果还在保修期内，叫工程师来一趟吧。
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22楼2011-03-22 20:59:58
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hyyyzyq

银虫 (小有名气)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
1.流动相必须超声，你可以先在别的瓶子里超，超好之后再倒入流动相瓶里就好了
2.一般哇哈哈的水有问题，里面好多杂质，建议用去离子的三蒸水
3.梯度洗脱的过程压力就不稳定，因为流动相的比例不同，压力自然不一样
4.铵盐缓冲液容易堵柱子，也导致柱压不稳定
5.为什么出得峰都是倒峰呢
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23楼2011-03-22 22:05:42
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kousilin

禁虫 (小有名气)
★
布丁3835(金币+2):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
24楼2011-03-22 23:44:33
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布丁3835

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hyyyzyq at 2011-03-22 22:05:42:
1.流动相必须超声，你可以先在别的瓶子里超，超好之后再倒入流动相瓶里就好了
2.一般哇哈哈的水有问题，里面好多杂质，建议用去离子的三蒸水
3.梯度洗脱的过程压力就不稳定，因为流动相的比例不同，压力自然不一 ...

我们现在用娃哈哈的水再蒸一下，压力波动会有所改善，但是并不能完全消失。谢谢你的建议。
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25楼2011-03-24 20:44:42
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布丁3835

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by kousilin at 2011-03-22 23:44:33:
可以考虑换一下水相~在这个PH条件下是否稳定~还有就是娃哈哈的水不纯，乐百氏的是色谱纯的，这个是安捷伦的工作人员测过的。。。

乐百氏的水普通超市能买到吗？谢谢。如果普通超市能买到，价钱合适的话，我们可以改用乐百氏的，免得再自己蒸水。
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26楼2011-03-24 20:46:23
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kousilin

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
27楼2011-03-28 20:12:52
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布丁3835

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by kousilin at 2011-03-28 20:12:52:
可以买到~我们实验室就在用~大量订购还有优惠。。。

平均下来多少钱一瓶呢？一瓶多少ml呢?企业都讲求成本的，理解哈
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28楼2011-03-28 20:20:33
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kousilin

禁虫 (小有名气)
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29楼2011-03-30 19:23:30
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j115090587

金虫 (正式写手)
★
布丁3835(金币+2): 谢谢参与
应该是通道跟流动相都有关系的，换两个通道试一下吧，还有不影响图谱的话，将就用吧，因为一般换通道能解决的，如果换别的流动相还是这样，那就是泵问题了，可以换了
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30楼2012-07-16 09:06:24
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gqianying

铜虫 (初入文坛)
★
布丁3835(金币+2): 谢谢参与
我也碰到同样的问题，我用的岛津的柱子，也是跑了几个样之后柱压就不稳了，频繁的上下晃，有人说是因为梯度洗脱的时候开始用了100%的水溶液的关系，这样会把柱子冲塌，过两天再用又稍微稳定一点了，求解释可能是什么原因啊？
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31楼2013-05-29 21:59:32
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Lshiny6楼
2011-03-17 16:54   回复  
布丁3835(金币+2):谢谢参与
zhouliangyu16楼
2011-03-22 17:14   回复  
布丁3835(金币+2):谢谢参与
zyxme17楼
2011-03-22 17:25   回复  
布丁3835(金币+2):谢谢参与
zhouliangyu18楼
2011-03-22 17:26   回复  
sjkcumt19楼
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