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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】HPLC菜鸟求助
汕头大学海洋科学接受调剂
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陈思容

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助】HPLC菜鸟求助

最近做高效液相，分离的效果不好；样品用DMSO溶解后加40%乙腈；流动相为40%乙腈。出峰效果总不是很好，求各位支招。rentime 7.418那个是我要的东东，用的是Agilent1200的仪器，Apollo c18的柱子（Alltech）
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1楼 2011-03-14 13:43:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

痴夷子皮

版主 (文坛精英)
★
karl2100(金币+1): 谢谢指教！ 2011-03-14 21:18:19
陈思容(金币+5): 2011-03-15 09:45:15
1、检测波长没选好，响应值太低了。可以查资料或扫紫外，确定检测波长；
2、改用缓冲液流动相调节pH（磷酸、三乙胺），改善峰型调整保留时间。。。；
3、流动相含DMSO么？若无而样品溶液有，会造成溶剂效应，改用流动相溶解样品或增加DMSO中样品浓度，以减少溶于40%乙腈中样品含DMSO的量，DMSO长期使用液相管路易老化，不建议流动相加DMSO；
4、梯度。。。
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5楼2011-03-14 18:51:46
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普通回帖

风人风语

木虫 (正式写手)
★
karl2100(金币+1): 多谢指教！ 2011-03-14 21:18:03
陈思容(金币+1): 2011-03-15 12:30:45
第一你这个基线跑得还不太平
第二你要的这个东西响应值太低，可以通过改变流动相的PH值来调节，或者加缓冲盐。在检测范围允许下还可以加大一点浓度。
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2楼2011-03-14 14:10:23
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cj22xmc

新虫 (正式写手)
建议用DAD检测器
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3楼2011-03-14 14:36:31
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乙酰水杨酸

木虫 (正式写手)
★
karl2100(金币+1): 谢谢！ 2011-03-14 21:18:39
波长貌似选的不好，峰高很低，另外建议DMSO用量要少，否则影响分离效果
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4楼2011-03-14 14:57:26
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陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 痴夷子皮 at 2011-03-14 18:51:46:
1、检测波长没选好，响应值太低了。可以查资料或扫紫外，确定检测波长；
2、改用缓冲液流动相调节pH（磷酸、三乙胺），改善峰型调整保留时间。。。；
3、流动相含DMSO么？若无而样品溶液有，会造成溶剂效应，改 ...

流动相中不含DMSO，样品溶液里面有的；
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6楼2011-03-15 09:48:11
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2011-03-15 09:48:11:
流动相中不含DMSO，样品溶液里面有的；

那就尽量避免或减少溶剂效应
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7楼2011-03-15 10:02:47
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weijun0534

木虫 (正式写手)
是不是柱子洗得不干净啊，好好洗洗柱子，多平衡会儿，或者在流动相中加酸。
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8楼2011-03-15 13:08:25
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qiqicharlotte

银虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
7楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2011-03-15 10:02:47
那就尽量避免或减少溶剂效应

溶剂效应，指什么？
我现在也有这个问题。 样品喊dmso 并且经过提取等步骤，可得多个峰。但是单纯用流动相把化合物溶解了，然后只能看见一个峰。虽然是我要的东西，感觉怪怪的...不明白啊...帮忙指点一下~ 谢~
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9楼2013-06-27 03:46:40
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JinyHuang

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你为什么要加DMSO？用碳18柱的话不妨降低乙腈的比例让保留时间推后
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10楼2013-06-27 21:58:20
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Samson_liang

银虫 (小有名气)
★
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有没有进过没有样品，只有DMSO加流动相的，你加了DMSO溶解样品，要考虑DMSO的溶剂峰对你的样品是否有干扰。至于建议，五楼说的很清楚了
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11楼2013-06-28 14:50:36
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selina093

金虫 (小有名气)
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引用回帖:
9楼: Originally posted by qiqicharlotte at 2013-06-27 03:46:40
溶剂效应，指什么？
我现在也有这个问题。 样品喊dmso 并且经过提取等步骤，可得多个峰。但是单纯用流动相把化合物溶解了，然后只能看见一个峰。虽然是我要的东西，感觉怪怪的...不明白啊...帮忙指点一下~ 谢~...

样品能用流动相溶解最好了，为什么还要DMSO先溶解
单纯流动相溶解进样谱图只有一个峰，而用DMSO溶解进样的色谱图有那么多杂峰，这就说明这个溶剂对谱图干扰很大
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12楼2013-06-28 16:31:50
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qiqicharlotte

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by selina093 at 2013-06-28 16:31:50
样品能用流动相溶解最好了，为什么还要DMSO先溶解
单纯流动相溶解进样谱图只有一个峰，而用DMSO溶解进样的色谱图有那么多杂峰，这就说明这个溶剂对谱图干扰很大...

因为做细胞代谢的话都是用DMSO 作溶剂的，后面还要对代谢物进行研究，所以DMSO 是迟早要碰上的。 最近的实验打算只用流动相溶解，但是化合物对pH 太敏感了，所以保留时间总是不稳定...惆怅啊...

所以DMSO 很尴尬...
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13楼2013-06-28 23:12:19
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