| 查看: 523 | 回复: 4 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
求助RT-PCR实验经验
|
|||
|
求助!! RT-RCR实验老是失败. 希望有心同仁能指点一二,不胜感激!!! 实验条件如下: cDNA第一链合成 方法采用Promega公司的M-MLV反转录cDNA合成系统 反转录体系采用2ugＲＮＡ 根据上述定量结果，1号样品取2ul，2号样品取1ul加入消过毒的离心管中，每管中提加入2ulOligo(dt)15。70℃,加热5min。立即在冰上冷却试管，简单离心使管底溶液聚集。 再按顺序依次加入下列组分. M-MLV 5X Reaction Buffer 5μl dATP, 10mM 1.25μl dCTP, 10mM 1.25μl dGTP, 10mM 1.25μl dTTP, 10mM 1.25μl RNasin抑制剂 25 units M-MLV RT 200 units 去离子水最终体积 25μl 轻弹管子混匀， 42℃孵育60min。 反应结束后，99℃加热5min,反转录酶失活。冷却。 (2) PCR扩增反应 为了确定最适的反应条件，选用了不同的反应体系（如下所示） PCR条件： 95 ℃、90 s， 95 ℃、1 min，56 ℃、1 min 和72 ℃、2min，共25个循环次数，最终的延长是在 72 ℃ 、 7 min ，样品在4 ℃孵育直至分析。 PCR产物鉴定 取10ulPCR产物，用1%琼脂糖凝胶快速电泳，EB染色，紫外灯下观察条带。 |
回复此楼» 猜你喜欢
292求调剂
已经有6人回复
-
0856材料与化工，270求调剂
已经有6人回复
-
江苏省农科院招调剂1名
已经有3人回复
-
0854复试调剂 276
已经有3人回复
-
材料学硕318求调剂
已经有4人回复
-
265分求调剂不调专业和学校有行学上就
已经有8人回复
-
成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了
已经有4人回复
-
材料化工调剂
已经有12人回复
-
0856调剂
已经有5人回复
-
275求调剂
已经有3人回复
5楼2006-08-17 23:51:35
zhyl1984
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2244.4
- 红花: 3
- 帖子: 330
- 在线: 184.6小时
- 虫号: 271562
- 注册: 2006-08-12
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
3楼2006-08-16 17:23:27
4楼2006-08-17 09:08:55
10