| 查看: 474 | 回复: 4 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
求助RT-PCR实验经验
|
|||
|
求助!! RT-RCR实验老是失败. 希望有心同仁能指点一二,不胜感激!!! 实验条件如下: cDNA第一链合成 方法采用Promega公司的M-MLV反转录cDNA合成系统 反转录体系采用2ugＲＮＡ 根据上述定量结果，1号样品取2ul，2号样品取1ul加入消过毒的离心管中，每管中提加入2ulOligo(dt)15。70℃,加热5min。立即在冰上冷却试管，简单离心使管底溶液聚集。 再按顺序依次加入下列组分. M-MLV 5X Reaction Buffer 5μl dATP, 10mM 1.25μl dCTP, 10mM 1.25μl dGTP, 10mM 1.25μl dTTP, 10mM 1.25μl RNasin抑制剂 25 units M-MLV RT 200 units 去离子水最终体积 25μl 轻弹管子混匀， 42℃孵育60min。 反应结束后，99℃加热5min,反转录酶失活。冷却。 (2) PCR扩增反应 为了确定最适的反应条件，选用了不同的反应体系（如下所示） PCR条件： 95 ℃、90 s， 95 ℃、1 min，56 ℃、1 min 和72 ℃、2min，共25个循环次数，最终的延长是在 72 ℃ 、 7 min ，样品在4 ℃孵育直至分析。 PCR产物鉴定 取10ulPCR产物，用1%琼脂糖凝胶快速电泳，EB染色，紫外灯下观察条带。 |
回复此楼» 猜你喜欢
垃圾破二本职称评审标准
已经有5人回复
-
三无产品还有机会吗
已经有4人回复
-
投稿返修后收到这样的回复，还有希望吗
已经有7人回复
-
压汞仪和BET测气凝胶孔隙率
已经有4人回复
-
博士申请都是内定的吗？
已经有14人回复
-
谈谈两天一夜的“延安行”
已经有13人回复
-
氨基封端PDMS和HDI反应快速固化
已经有11人回复
-
之前让一硕士生水了7个发明专利，现在这7个获批发明专利的维护费可从哪儿支出哈？
已经有11人回复
-
论文投稿求助
已经有4人回复
-
Applied Surface Science 这个期刊。有哪位虫友投过的能把word模板发给我参考一下嘛
已经有3人回复
 |
2楼2006-08-16 16:37:05
zhyl1984
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2244.4
- 红花: 3
- 帖子: 330
- 在线: 184.6小时
- 虫号: 271562
- 注册: 2006-08-12
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
3楼2006-08-16 17:23:27
4楼2006-08-17 09:08:55
5楼2006-08-17 23:51:35