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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助 免疫共沉淀实验
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寒蕤

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wyyun3025 at 2011-03-07 20:09:12:
我正准备做免疫沉淀

那你有好的建议给点吧。
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11楼2011-03-07 21:17:09
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 寒蕤 at 2011-03-07 17:24:34:
10cm皿的细胞不够吗？

我还没有做。但是《分子克隆》中的免疫共沉淀实验要30个长满细胞的10 cm皿。
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12楼2011-03-07 22:28:58
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寒蕤

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jurkat.1640 at 2011-03-07 22:28:58:
我还没有做。但是《分子克隆》中的免疫共沉淀实验要30个长满细胞的10 cm皿。

再请教一个问题：《分子克隆》上面的NETN中的氯化钠是100mM,怎么下面有说是“NETN,含900mM氯化钠”？这个是什么意思？谢谢！
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13楼2011-03-08 15:57:47
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
are you sure your target protein expressed at this stage?
If yes, try to use low concentration of wash buffer for wash steps
and also can try to use cross link
if you think their interaction is direct, you also can try to use yeast two hybrid
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有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
14楼2011-03-08 21:11:53
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by 寒蕤 at 2011-03-08 15:57:47:
再请教一个问题：《分子克隆》上面的NETN中的氯化钠是100mM,怎么下面有说是“NETN,含900mM氯化钠”？这个是什么意思？谢谢！

不知道
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15楼2011-03-08 21:27:57
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寒蕤

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wangleisdnu at 2011-03-08 21:11:53:
are you sure your target protein expressed at this stage?
If yes, try to use low concentration of wash buffer for wash steps
and also can try to use cross link
if you think their interaction is  ...

谢谢，现在我用交联剂试试看。
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16楼2011-03-09 10:09:21
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 寒蕤 at 2011-03-09 10:09:21:
谢谢，现在我用交联剂试试看。

hopefully it will work
good luck
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有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
17楼2011-03-09 15:27:16
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寒蕤

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wangleisdnu at 2011-03-09 15:27:16:
hopefully it will work
good luck

Thank you!
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18楼2011-03-09 17:08:39
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asgate

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
细胞太多了。。。裂解液这么少能裂开了吗？你就用你师兄一样的裂解液，但是细胞不用这么多。
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19楼2012-08-23 18:28:05
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小核桃小

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 寒蕤 at 2011-03-07 19:41:30
我用的裂解液是150mMNaCl,10mMTris-HCl pH8.0,1%NP40,1mM PMSF.
是不是去垢剂用CHAPS比NP40更好呢？这两个有什么区别？它们的浓度用多大比较合适呢？谢谢！...

有专门做IP的裂解液啊，温和型的，据说如果用WB的裂解液，会破坏蛋白之间的相互作用。
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呆呆的呆呆
20楼2013-07-07 10:26:28
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