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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助 免疫共沉淀实验
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寒蕤

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助 免疫共沉淀实验 已有8人参与

各位好！小妹最近在做免疫共沉淀实验，但是几轮下来没有得到结果。我用的是10cm的皿，加入500ul-600ul裂解液，protein G beads的量为40ul，一抗为1.5ug。
抗体先和上清裂解液4度孵育过夜，然后又加beads4度孵育4h。最后用裂解液洗三次。做了western后可以检测到目的蛋白，但是没有检测到相互作用蛋白。希望大家给点建议。谢谢！
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1楼 2011-03-07 14:57:56
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
are you sure your target protein expressed at this stage?
If yes, try to use low concentration of wash buffer for wash steps
and also can try to use cross link
if you think their interaction is direct, you also can try to use yeast two hybrid
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有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
14楼2011-03-08 21:11:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-07 19:45:06
但是没有检测到相互作用蛋白

说不定就没有发生相互作用……
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-03-07 17:08:08
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寒蕤

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jurkat.1640 at 2011-03-07 17:05:38:
可能细胞量不够

10cm皿的细胞不够吗？
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4楼2011-03-07 17:24:34
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寒蕤

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-07 17:08:08:
但是没有检测到相互作用蛋白

说不定就没有发生相互作用……

但是之前实验室的师兄通过串联亲和纯化（TAP）的方法吊到了与目的蛋白相互作用的蛋白了，现在导师就是让我要CoIP做出来。但是不知道为什么，CoIP就出不来了？现在希望大家可以指点一下。谢谢了！
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5楼2011-03-07 17:28:11
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