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寒蕤

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】求助免疫共沉淀实验已有8人参与

各位好！小妹最近在做免疫共沉淀实验，但是几轮下来没有得到结果。我用的是10cm的皿，加入500ul-600ul裂解液，protein G beads的量为40ul，一抗为1.5ug。
抗体先和上清裂解液4度孵育过夜，然后又加beads4度孵育4h。最后用裂解液洗三次。做了western后可以检测到目的蛋白，但是没有检测到相互作用蛋白。希望大家给点建议。谢谢！

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1楼 2011-03-07 14:57:56

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寒蕤

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引用回帖:

Originally posted by wangleisdnu at 2011-03-08 21:11:53:
are you sure your target protein expressed at this stage?
If yes, try to use low concentration of wash buffer for wash steps
and also can try to use cross link
if you think their interaction is ...

谢谢，现在我用交联剂试试看。