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nestzhao

木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】关于双层平板发

在进行双层平板法培养噬菌体时,倾倒上层培养基时,温度低点,很容易凝固,无法很好的形成上层琼脂;温度高一点,怕使菌体失活或活性降低。

所以要向大家请教一下,有没有什么好方法,能够方便的倾倒上层琼脂?
在做双层平板法时需要注意什么??

谢谢大家乐哈
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春雨chen

铁虫 (初入文坛)


★ ★
nestzhao(金币+1): 2011-03-29 21:05:03
rainwander(金币+2): 鼓励交流~~~ 2011-03-30 11:10:41
大多数噬菌体耐冷不耐热,大多数噬菌体于55~60℃,几分钟至十几分钟即被灭活,100℃时在几秒钟内即可灭活噬菌体。
直接加热溶解培养基会使培养基水分减少,高压灭菌15min可以避免水分减少且可以二次灭菌。培养基溶解后放到水浴箱中51或52度保温。
等下层凝后再从水浴箱中拿出与寄主细胞混合,倒到平皿后迅速铺平。
6楼2011-03-29 15:02:51
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普通回帖

nestzhao(金币+1): 2011-03-02 23:00:18
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~~ 2011-03-30 11:11:52
其实这个主要靠经验,把温度控制好一点,我觉得做多了也就熟练了!

不知道其它朋友有没有更好的方法呢?
2楼2011-03-02 17:36:39
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chenyyy

无虫 (正式写手)


nestzhao(金币+1): 2011-03-09 22:38:14
不汤手的感觉、。。。。
3楼2011-03-09 11:28:05
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smiled001

禁虫 (小有名气)


nestzhao(金币+2): 2011-03-09 22:38:22
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~~ 2011-03-30 11:11:00
本帖内容被屏蔽

4楼2011-03-09 17:05:53
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伊娃EVA

金虫 (职业作家)



nestzhao(金币+1): 2011-03-29 08:54:47
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~~ 2011-03-30 11:10:53
都是47度  然后水浴锅离的近点 然后还好了 一定不要凝之后再放水浴锅 那样就不能用了
5楼2011-03-29 08:48:29
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493805411

木虫 (小有名气)


nestzhao(金币+1): 2011-03-30 08:59:56
用手背感觉,稍微有点烫手,但能够忍受就可以了
7楼2011-03-29 21:17:54
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虫儿7893

银虫 (小有名气)


★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流~~~ 2011-03-30 11:12:10
nestzhao(金币+1): 2011-03-30 12:17:09
把上层培养基分装到试管再灭菌,每支试管正好倒一个平板。用的时候把试管放在水浴锅,可以把温度尽量控制得低一点而不用担心倒不完就凝固。
8楼2011-03-30 10:53:31
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墨香若水

木虫 (著名写手)


琼脂浓度1%或更低(0.8%)
9楼2011-03-30 12:38:14
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吱吱喳喳

铁虫 (初入文坛)


噬菌体的表基温度控制

nestzhao(金币+1): 2011-04-05 22:38:28
我以前因为这个耽误了很多时间,后来发现你可以提前化了表基,高压什么的放到水浴锅里48°保温1个小时,然后直接用,好的很!
10楼2011-04-05 21:37:05
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microxy

铁杆木虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2011-03-30 12:38:14:
琼脂浓度1%或更低(0.8%)

根据自己的实验经验,这应该是最好的解决方法,如在倾注上层平板前  把下层平板在培养箱中预热一下更好!
11楼2011-04-06 08:06:12
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蓝风叙

木虫 (著名写手)


上层 少加点琼脂  试试看
12楼2011-04-06 08:55:29
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郝钊

金虫 (小有名气)


nestzhao(金币+1): 2011-04-06 17:58:56
将琼脂浓度稍微降低一点会好一些,温度55度时不会烫死的。下层平板用之前在培养箱温育好一些,上层不会凝的太快。
13楼2011-04-06 11:35:25
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