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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于双层平板发
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nestzhao

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于双层平板发

在进行双层平板法培养噬菌体时，倾倒上层培养基时，温度低点，很容易凝固，无法很好的形成上层琼脂；温度高一点，怕使菌体失活或活性降低。

所以要向大家请教一下，有没有什么好方法，能够方便的倾倒上层琼脂？
在做双层平板法时需要注意什么？？

谢谢大家乐哈
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1楼 2011-03-02 16:32:33
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

春雨chen

铁虫 (初入文坛)
★ ★
nestzhao(金币+1): 2011-03-29 21:05:03
rainwander(金币+2): 鼓励交流~~~ 2011-03-30 11:10:41
大多数噬菌体耐冷不耐热，大多数噬菌体于55～60℃，几分钟至十几分钟即被灭活，100℃时在几秒钟内即可灭活噬菌体。
直接加热溶解培养基会使培养基水分减少，高压灭菌15min可以避免水分减少且可以二次灭菌。培养基溶解后放到水浴箱中51或52度保温。
等下层凝后再从水浴箱中拿出与寄主细胞混合，倒到平皿后迅速铺平。
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6楼2011-03-29 15:02:51
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普通回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)
★
nestzhao(金币+1): 2011-03-02 23:00:18
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~~ 2011-03-30 11:11:52
其实这个主要靠经验，把温度控制好一点，我觉得做多了也就熟练了！

不知道其它朋友有没有更好的方法呢？
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2楼2011-03-02 17:36:39
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chenyyy

无虫 (正式写手)
nestzhao(金币+1): 2011-03-09 22:38:14
不汤手的感觉、。。。。
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3楼2011-03-09 11:28:05
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smiled001

禁虫 (小有名气)
★
nestzhao(金币+2): 2011-03-09 22:38:22
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~~ 2011-03-30 11:11:00
本帖内容被屏蔽
4楼2011-03-09 17:05:53
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伊娃EVA

金虫 (职业作家)
★
nestzhao(金币+1): 2011-03-29 08:54:47
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~~ 2011-03-30 11:10:53
都是47度  然后水浴锅离的近点 然后还好了 一定不要凝之后再放水浴锅 那样就不能用了
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5楼2011-03-29 08:48:29
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493805411

木虫 (小有名气)
nestzhao(金币+1): 2011-03-30 08:59:56
用手背感觉，稍微有点烫手，但能够忍受就可以了
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7楼2011-03-29 21:17:54
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虫儿7893

银虫 (小有名气)
★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流~~~ 2011-03-30 11:12:10
nestzhao(金币+1): 2011-03-30 12:17:09
把上层培养基分装到试管再灭菌，每支试管正好倒一个平板。用的时候把试管放在水浴锅，可以把温度尽量控制得低一点而不用担心倒不完就凝固。
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8楼2011-03-30 10:53:31
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墨香若水

木虫 (著名写手)
琼脂浓度1%或更低（0.8%）
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9楼2011-03-30 12:38:14
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吱吱喳喳

铁虫 (初入文坛)

噬菌体的表基温度控制

nestzhao(金币+1): 2011-04-05 22:38:28
我以前因为这个耽误了很多时间，后来发现你可以提前化了表基，高压什么的放到水浴锅里48°保温1个小时，然后直接用，好的很！
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10楼2011-04-05 21:37:05
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microxy

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2011-03-30 12:38:14:
琼脂浓度1%或更低（0.8%）

根据自己的实验经验，这应该是最好的解决方法，如在倾注上层平板前  把下层平板在培养箱中预热一下更好！
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11楼2011-04-06 08:06:12
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蓝风叙

木虫 (著名写手)
上层 少加点琼脂  试试看
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12楼2011-04-06 08:55:29
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郝钊

金虫 (小有名气)
nestzhao(金币+1): 2011-04-06 17:58:56
将琼脂浓度稍微降低一点会好一些，温度55度时不会烫死的。下层平板用之前在培养箱温育好一些，上层不会凝的太快。
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13楼2011-04-06 11:35:25
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