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ksnight

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】用过葡聚糖凝胶的请进！！！

1.        目的：目标分子Mw=5300  杂质分子2000，及3300。分离总量约150mg 其中目标分子量约50mg。 杂质和目标分子均水溶。（上的量是否太多？）
2.        方法：采用Sephadex-G25 （普通）1000-5000。床体积4-6ml/g 折中算5，用的柱子是内径2cm，长度35cm，柱床体积110ml。计划用干凝胶约25g，（干凝胶量是否合适？装柱长度是否合适？)一般情况下，柱床体积和外水体积的比例是多少？用此种类型的凝胶，目标分子不保留，直接流出，杂质分子在里面保留一定时间，达到分离目的。

凝胶预处理和装柱子：1，用蒸馏水溶胀8h，倾倒除去一些小的漂浮的凝胶。2，再倒入沸水中约0.5h，除去气泡。冷却后填柱子（自然沉降）。（除去气泡煮沸的时间是否足够，长时间煮沸是否会破坏凝胶的结构？）（是否需要用盐水来进行自然沉降？）（需要用盐水来溶胀吗？）（有必要用指示剂来确定柱子是否可用吗？）

上样：用2-5ml盐水溶解后加入，然后用盐水洗脱剂洗脱。待到收集到外水体积Vo后，开始把收集的水溶液用二氯甲烷萃取，干燥，浓缩，点板（TLC），换瓶收集，核磁分别确定是否分纯。

没有恒流泵怎么控制流速呢？

这是我的全过程，帮忙解决下以上问题，过程有什么地方有不妥的地方请指出，谢谢！！！

[ Last edited by ksnight on 2011-2-28 at 20:16 ]
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1楼2011-02-28 17:36:35
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lingde_h

铁虫 (初入文坛)
我是90度水浴3h了
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7楼2012-03-18 20:26:36
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