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tangw_007

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有人做过sacB基因方面的研究嘛？请大侠进来，请教一下问题，呵呵

有人做过sacB基因方面的研究嘛？请大侠进来，请教一下问题，呵呵！
我现在想利用sacB对大肠杆菌致死这一原理，来做筛选标记，但是遇到些问题，有哪位高手能帮帮忙不，保证追加大量金币，呵呵！
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1楼 2011-02-28 16:43:08
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没有眼泪

铜虫 (初入文坛)
tangw_007(金币+5): 谢谢，谢谢，你讲的这些，我都明白，我是想知道，它使得大肠杆菌死亡的过程，是不是一个毒性积累过程，有没有可能在这个过程中出现突变菌株？为什么我把这个基因构建到T载体上了，大肠杆菌在加入蔗糖液体里面并不死亡，测序正确，前面的调控序列也都扩出来了。 2011-03-01 16:29:17
枯草芽孢杆菌sacB基因编码分泌型蔗糖果聚糖
酶，该酶能催化蔗糖水解和合成高分子量的果聚糖。
蔗糖果聚糖酶在食品、制药、化妆品和纺织工业中都有
很广泛的应用前景 。鉴于sacB基因具有合成果聚糖的能力，将细菌编码蔗糖果聚糖酶
的sacB基因转人玉米，使转化后的玉米获得了合成果
聚糖的能力 。sacB基因在植物中表达，可以明显提
高果聚糖的积累，增强植物的耐寒和耐旱能力 。但
高分子量果聚糖积累对细胞存在潜在的毒性作用，可
造成细胞死亡。已发现在5％或5％以上的蔗糖存在
下，sacB基因在革兰氏阴性菌(如E．coli，Erwinia
chrysanthemi和Legionella pneumophila)中的表达导致这
些细菌死亡。而sacB 基因也使革兰氏阳性菌
Corynebacteriu glutamicum 以及分支杆菌如
Brevibaeterium，Rhodococcus等属的细菌获得蔗糖敏感
的特性 。基于这种特性，sacB基因在遗传上被作
为一种阴性筛选克隆的标记应用于生物学的研究
中.
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2楼2011-03-01 10:35:23
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没有眼泪

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 鼓励下 2011-03-02 18:09:38
tangw_007(金币+15): 2011-03-02 18:23:35
SacB基因编码果聚糖蔗糖酶(Levansucrase)，催化从蔗糖中转移果糖残基到各个受体蛋白上, 影响受体的正常功能。含有这种质粒的大肠杆菌或农杆菌在含5 %的蔗糖培养基中培养时, SacB 基因产物能够使大肠杆菌或农杆菌致死。
这是一种说法，和毒性积累不太一样。
我们做过阴性对照，在含5 %的蔗糖培养基上基本看不到菌落，只是偶尔有个别的长出。
我没做过它的具体功能，只是把它作为一个筛选标记。
“枯草芽孢杆菌sacB基因的功能验证及应用”你看看这篇文章，和你做的差不多。
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3楼2011-03-02 13:12:07
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