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【求助/交流】分子克隆,建库
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【求助/交流】分子克隆,建库
转化大肠杆菌平板阳性克隆数量很少,十个板,每板平均十个,建库的话数量太少,请问这种情况怎么办?
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2011-02-16 08:59:07
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-超越beyond(金币+1): 2011-02-16 11:27:09
翱宇(金币+1): 鼓励交流! 2011-02-16 13:05:39
-超越beyond(金币+1): 2011-02-18 10:03:46
提高克隆片段和载体的量啊,
转化用电转,
涂板用150mm平板
不过首先你要知道你的文库多样性要求多少
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2楼
2011-02-16 10:46:34
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zhangxn2010
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-超越beyond(金币+1): 2011-02-16 11:29:26
-超越beyond(金币+1): 2011-02-18 10:03:57
就是提高转化效率啊,优化一下转化方法和
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3楼
2011-02-16 11:14:20
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Originally posted by
gongeleven
at 2011-02-16 10:46:34:
提高克隆片段和载体的量啊,
转化用电转,
涂板用150mm平板
不过首先你要知道你的文库多样性要求多少
要求至少400吧
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4楼
2011-02-16 11:27:59
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Originally posted by
zhangxn2010
at 2011-02-16 11:14:20:
就是提高转化效率啊,优化一下转化方法和
如何优化啊?从哪几方面啊?我用的载体是pMD 19
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5楼
2011-02-16 11:29:17
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1949stone(金币+1): 学习交流 2011-02-16 19:05:37
提高感受态细胞的转化效率
提高载体与片段的连接效率
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6楼
2011-02-16 11:41:54
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翱宇(金币+1): 鼓励交流 2011-02-16 13:06:03
-超越beyond(金币+1): 2011-02-18 10:04:14
多样性400,你文库大小800就够了,就按照普通克隆的做,一块平板长800个菌落不难,
把DNA用量提高就可以了,
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7楼
2011-02-16 11:54:39
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wangds
at 2011-02-16 11:41:54:
提高感受态细胞的转化效率
提高载体与片段的连接效率
怎么提高效率啊
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8楼
2011-02-16 14:57:35
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wangds
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+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
制备感受态细胞的效率
连接液中有效连接效率
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9楼
2011-02-19 17:23:53
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phoenix211
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小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
用电转的话效率会高很多
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10楼
2011-02-19 17:57:51
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三磷酸腺苷
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小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
感受态很重要,因为很少很少的质粒就能饱和感受态了。如果自己做的感受态不行,那么就去买吧~
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11楼
2011-02-19 18:06:51
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