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-超越beyond

铁虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】分子克隆,建库

转化大肠杆菌平板阳性克隆数量很少,十个板,每板平均十个,建库的话数量太少,请问这种情况怎么办?
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)



-超越beyond(金币+1): 2011-02-16 11:27:09
翱宇(金币+1): 鼓励交流! 2011-02-16 13:05:39
-超越beyond(金币+1): 2011-02-18 10:03:46
提高克隆片段和载体的量啊,
转化用电转,
涂板用150mm平板

不过首先你要知道你的文库多样性要求多少
2楼2011-02-16 10:46:34
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)


-超越beyond(金币+1): 2011-02-16 11:29:26
-超越beyond(金币+1): 2011-02-18 10:03:57
就是提高转化效率啊,优化一下转化方法和
3楼2011-02-16 11:14:20
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2011-02-16 10:46:34:
提高克隆片段和载体的量啊,
转化用电转,
涂板用150mm平板

不过首先你要知道你的文库多样性要求多少

要求至少400吧
4楼2011-02-16 11:27:59
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2011-02-16 11:14:20:
就是提高转化效率啊,优化一下转化方法和

如何优化啊?从哪几方面啊?我用的载体是pMD 19
5楼2011-02-16 11:29:17
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wangds

金虫 (正式写手)



1949stone(金币+1): 学习交流 2011-02-16 19:05:37
提高感受态细胞的转化效率
提高载体与片段的连接效率
6楼2011-02-16 11:41:54
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)



翱宇(金币+1): 鼓励交流 2011-02-16 13:06:03
-超越beyond(金币+1): 2011-02-18 10:04:14
多样性400,你文库大小800就够了,就按照普通克隆的做,一块平板长800个菌落不难,

把DNA用量提高就可以了,
7楼2011-02-16 11:54:39
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by wangds at 2011-02-16 11:41:54:
提高感受态细胞的转化效率
提高载体与片段的连接效率

怎么提高效率啊
8楼2011-02-16 14:57:35
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wangds

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流

制备感受态细胞的效率
连接液中有效连接效率
9楼2011-02-19 17:23:53
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phoenix211

金虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流

用电转的话效率会高很多
10楼2011-02-19 17:57:51
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流

感受态很重要,因为很少很少的质粒就能饱和感受态了。如果自己做的感受态不行,那么就去买吧~
11楼2011-02-19 18:06:51
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