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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】分子克隆，建库
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】分子克隆，建库

转化大肠杆菌平板阳性克隆数量很少，十个板，每板平均十个，建库的话数量太少，请问这种情况怎么办？
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1楼 2011-02-16 08:59:07
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
-超越beyond(金币+1): 2011-02-16 11:27:09
翱宇(金币+1): 鼓励交流！ 2011-02-16 13:05:39
-超越beyond(金币+1): 2011-02-18 10:03:46
提高克隆片段和载体的量啊，
转化用电转，
涂板用150mm平板

不过首先你要知道你的文库多样性要求多少
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2楼2011-02-16 10:46:34
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
-超越beyond(金币+1): 2011-02-16 11:29:26
-超越beyond(金币+1): 2011-02-18 10:03:57
就是提高转化效率啊，优化一下转化方法和
赞一下 回复此楼
3楼2011-02-16 11:14:20
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2011-02-16 10:46:34:
提高克隆片段和载体的量啊，
转化用电转，
涂板用150mm平板

不过首先你要知道你的文库多样性要求多少

要求至少400吧
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4楼2011-02-16 11:27:59
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2011-02-16 11:14:20:
就是提高转化效率啊，优化一下转化方法和

如何优化啊？从哪几方面啊？我用的载体是pMD 19
赞一下 回复此楼
5楼2011-02-16 11:29:17
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wangds

金虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1): 学习交流 2011-02-16 19:05:37
提高感受态细胞的转化效率
提高载体与片段的连接效率
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6楼2011-02-16 11:41:54
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
翱宇(金币+1): 鼓励交流 2011-02-16 13:06:03
-超越beyond(金币+1): 2011-02-18 10:04:14
多样性400，你文库大小800就够了，就按照普通克隆的做，一块平板长800个菌落不难，

把DNA用量提高就可以了，
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7楼2011-02-16 11:54:39
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wangds at 2011-02-16 11:41:54:
提高感受态细胞的转化效率
提高载体与片段的连接效率

怎么提高效率啊
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8楼2011-02-16 14:57:35
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wangds

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

制备感受态细胞的效率
连接液中有效连接效率
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9楼2011-02-19 17:23:53
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phoenix211

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

用电转的话效率会高很多
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10楼2011-02-19 17:57:51
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

感受态很重要，因为很少很少的质粒就能饱和感受态了。如果自己做的感受态不行，那么就去买吧~
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11楼2011-02-19 18:06:51
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