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未知树木虫 (著名写手)
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[交流]
【求助/交流】如何降低，多克隆抗体非特异性？ 已有7人参与
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制备了一种多抗，但是，在进行细胞内免疫荧光实验时，非特异性非常非常的强，几乎与实验组无法区分。 制备过程： 1，克隆目的基因至表达载体pMal-C4x。 2，表达纯化目的蛋白。X-MBP（带有MBP标签的融合蛋白） 3，纯化融合蛋白X-MBP，很纯！ 4，注射新西兰大白兔。 5，收集血清。 PS： 注射大白兔之前，没有切除标签蛋白MBP（约42KDa）. 在western blot试验中， 该抗体的特异性非常好。 但是， 当用于细胞实验室时， 非特异性出奇的高， 实验组和对照组， 一模一样， 几乎看不出任何区别。 在网上查看看了一些方法， 仍然不是太明白。 如何才能有效地降低特异性。 请各位虫友支招，万分感谢~ |
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rainy-shiyu
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13楼2013-02-27 07:29:11
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2楼2011-02-15 09:03:12
snoopyzxx
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dhd997(金币+5): good 2011-02-15 14:11:36
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dhd997(金币+5): good 2011-02-15 14:11:36
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1、用你纯化的重组蛋白偶联制作亲和层析介质，然后进行亲和纯化。 2、设计多肽免疫。 3、非融合表达目的蛋白。 但不管怎样免疫，用免疫原偶联进行亲和纯化都是需要的。用抗血清效果肯定要差些。 |
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hyanzi99203楼2011-02-15 09:30:23
jurkat.1640
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