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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】抑菌试验
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飞奔吧珍宝猪

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】抑菌试验

感谢各位的热心帮助，我还是希望能用常量肉汤稀释法，不得已才换其他办法（老板的坚持，其实我也更赞同滤纸片法。但是老板也有他的想法)。希望能有更多的虫友给我提建议，谢谢！

我是药物分析方向的，对这方面不是很熟悉，特此请教O(∩_∩)O
      我们和天然药物方向的一个实验室合作，他们负责用不同的有机溶剂去提取某中药中的有效成分，而我们负责评价其抑菌效果。我们拟用常量营养肉汤稀释法，即在液体培养基中加入不同浓度的提取物溶液，而后加入菌接种液，适宜条件下培养后，测定其QD值，用光密度来表征和计算抑菌率。
      问题就这样产生了，由于是有机溶剂提取的，其水溶性必然很差，要想配制较高浓度的提取物水溶液不可实现（即使已经使用了5%DMSO这样的助溶手段）。因此有两点设想：（1）直接将提取出的中药有效部位不经干燥，直接加入液体培养基中，但是常见有机溶剂如乙醇等，本身就有一定的抑菌效果，故需要做等量的纯溶剂的空白对照，然后扣除有机溶剂产生的那部分抑菌效果，但是两者的抑菌效果具有加和性吗？能这样扣除吗？（2）将提取物干燥，之后用5%DMSO助溶，并且用羟乙基纤维素等分散剂，形成均匀的类混悬体系，但如此操作的话，有效成分得不到很好的溶解，对抑菌效果有影响吗？影响的程度大吗？（细胞及药物试验是经常这样实现的）
     希望有相关知识背景及经验的虫友们能给点建议及指导！不胜感激！

[ Last edited by 飞奔吧珍宝猪 on 2011-1-17 at 20:09 ]
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1楼 2011-01-17 16:28:46
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-01-17 19:32:39
飞奔吧珍宝猪(金币+2): 谢谢。 2011-01-17 20:06:31
抑菌显然不能用叠加计算的，建议用滤纸片法，可以用中药粗提液浸润滤纸片，将滤纸片烘干（让有机溶剂挥发完）后，贴在已涂布好菌液的平板中，同时做一个相应有机溶剂的对照！
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4楼2011-01-17 18:43:01
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蒙新2010

金虫 (正式写手)
飞奔吧珍宝猪(金币+1): 2011-01-17 20:06:41
用OD值本身就不准确啊，建议查看其他方法
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2楼2011-01-17 16:45:34
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★
飞奔吧珍宝猪(金币+1): 2011-01-17 20:06:45
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~ 2011-04-04 19:45:10
其实你也可以混菌倒培养基，然后再给板子上点上滤纸片，再给滤纸片上点重要提取物，不过你得事先把中药提取物完全溶解好！
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3楼2011-01-17 17:43:07
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371147760

木虫 (著名写手)

常量肉汤稀释法

★ ★
飞奔吧珍宝猪(金币+2): 2011-01-21 10:30:01
rainwander(金币+2): 鼓励交流~~ 2011-04-04 19:45:32
你提取的中药有效成分的浓度高吗，如果高的话你你直接用肉汤稀释，如果稀释的倍数高了那么溶剂（比如说乙醇）的作用就不用考虑了（因为稀释了很多倍），如果有效成分的浓度低的话，可以做个对照也可以干燥后再稀释。
本身用OD值判定结果很不准确，你用常量稀释法直接用眼观察有没细菌生长就可以判定结果吧，也可以用平板计数法判断前后细菌数目的变化情况
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5楼2011-01-20 15:59:25
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