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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】立春红 WB 染色
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scorpioneuro

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】立春红 WB 染色

请教一下

由于样品没有合适的loading control，打算用立春红染色来做loading control，

但是用PVDF膜，发现染色效果不佳，无法用作loading control。

（但用该法在NC膜上染色，效果要好很多）

请问一下：

1  PVDF膜用立春红染色 是不是比 NC膜要差？

2 有没有适合于PVDF膜的立春红染色方法？[由于目前预实验在PVDf上效果可，故不考虑换做NC膜]
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1楼2011-01-15 21:19:23
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xhjggl

木虫 (正式写手)
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2011-01-16 09:36:44
scorpioneuro(金币+1): 3x 2011-01-16 16:29:43
立春红染色染色灵敏度差，100NG  有些公司，例如上海生工有高灵敏的膜染色方法。
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2楼2011-01-15 21:33:20
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2):经验之谈啊。 2011-01-16 09:37:03
scorpioneuro(金币+2): 3x 2011-01-16 16:29:55
我用PVDF膜染得好好的啊~
不过就算用膜来染色当control，发文章的时候人家认不认的啊……
其实可以混一个已知量BSA当内参的
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3楼2011-01-15 22:15:06
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scorpioneuro

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by xhjggl at 2011-01-15 21:33:20:
立春红染色染色灵敏度差，100NG  有些公司，例如上海生工有高灵敏的膜染色方法。

这个高灵敏度的染色方法对后续的免疫反应有影响么？

另外 具体指的是那一种，能否提供详细信息，谢谢！
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4楼2011-01-16 00:56:53
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scorpioneuro

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-15 22:15:06:
我用PVDF膜染得好好的啊~
不过就算用膜来染色当control，发文章的时候人家认不认的啊……
其实可以混一个已知量BSA当内参的

膜染色当control 肯定是没哟问题的，这个在很多文章，包括高影响力的杂志里都有有这种方法。

我的样品的体液来的，里面几乎还有各种蛋白，混入BSA做内标（类似于内标）可能也不太合适。

不知这位朋友有没有混入BSA做内参的具体文献，方便的话，请提供一些参考参考，谢谢！
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5楼2011-01-16 01:00:11
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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dhd997(金币+3):good 2011-01-16 11:54:51
scorpioneuro(金币+1): 3x 2011-01-16 16:30:14
引用回帖:
Originally posted by scorpioneuro at 2011-01-16 01:00:11:



膜染色当control 肯定是没哟问题的，这个在很多文章，包括高影响力的杂志里都有有这种方法。

我的样品的体液来的，里面几乎还有各种蛋白，混入BSA做内标（类似于内标）可能也不太合适。

不知这位朋友 ...

体液就麻烦了……确实是存在缺乏内参的问题
不过按照细胞因子蛋白芯片的经验，公司他们是先把蛋白定好量，然后根据这个量来混入阳性对照。然后就是孵膜后检测（其实跟WB差不多），然后根据阳性对照均一化数据
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6楼2011-01-16 09:53:45
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xhjggl

木虫 (正式写手)
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rainwander(金币+1): 哈哈，又见到你了，生工男~~~ 2011-01-16 14:07:42
scorpioneuro(金币+1): 3x 2011-01-16 16:30:21
Protein Stains P：超敏可逆印迹膜染色试剂盒II        
产品说明： 常用的丽春红对转印膜上蛋白质的检测灵敏度不高，本试剂采用双重染色法灵敏度高、低背景、蛋白条带清晰和实验方便快速等优点，最低能够检测出5ng的蛋白条带。经过适当的处理后，不影响转印膜上蛋白质的抗原性。可进行Western blot，Dot blot等免疫学实验。由染色液I, 脱色液和染色液II组成.储存条件：18～25℃
编号        包装        价格        产地
BSP025        10membranes        240        生工
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7楼2011-01-16 12:50:14
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
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引用回帖:
Originally posted by xhjggl at 2011-01-16 12:50:14:
Protein Stains P：超敏可逆印迹膜染色试剂盒II        
产品说明： 常用的丽春红对转印膜上蛋白质的检测灵敏度不高，本试剂采用双重染色法灵敏度高、低背景、蛋白条带清晰和实验方便快速等优点，最低能够检测出5ng的蛋 ...

生工男你好~
生工男再见~
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8楼2011-01-16 13:07:42
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scorpioneuro

木虫 (著名写手)
[quote]Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-16 13:07:42:


生工男你好~
生工男再见~ [/quot
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9楼2011-01-16 16:26:31
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scorpioneuro

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-15 22:15:06:
我用PVDF膜染得好好的啊~
不过就算用膜来染色当control，发文章的时候人家认不认的啊……
其实可以混一个已知量BSA当内参的

其实我们只是染色的情况不固定，有时候可，有时候又不行（但还是有条带）

重复过几次都有类似情况

不知你的立春红染色protocol是咋样的？ 能否发上来借鉴下
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10楼2011-01-16 16:29:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
dhd997(金币+2): 当然不是。我们也用。 2011-01-16 19:01:00
scorpioneuro(金币+2): 3x 2011-01-17 00:50:59
引用回帖:
Originally posted by scorpioneuro at 2011-01-16 16:29:03:


其实我们只是染色的情况不固定，有时候可，有时候又不行（但还是有条带）

重复过几次都有类似情况

不知你的立春红染色protocol是咋样的？ 能否发上来借鉴下

我们用碧云天的快速丽春红染液
洗掉的话就用普通TBST加大转速多洗几次就干净了
（不是广告，亲身实验）
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11楼2011-01-16 18:56:22
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scorpioneuro

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-16 18:56:22:


我们用碧云天的快速丽春红染液
洗掉的话就用普通TBST加大转速多洗几次就干净了
（不是广告，亲身实验）

xiexie ! 有实践经验，肯定没有什么什么问题


只要对后续的免疫反应物影响就ok了

试试看
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12楼2011-01-17 00:52:15
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