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snowkelly

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[交流] 【求助/交流】求同聚物加为链接技术原理和实验方法

求同聚物加为链接技术原理和实验方法

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1楼 2011-01-11 16:11:26

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real339

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★
snowkelly(金币+2): 2011-01-12 18:38:36
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-12 19:35:55

所谓同聚物加尾法就是利用末端转移酶在载体及外源双链DNA的3’端各加上一段寡聚核苷酸，制成人工黏性末端，外源DNA和载体DNA分子要分别加上不同的寡聚核苷酸，如dA(dG)和dT(dC),然后在DNA连接酶的作用下涟接成为重组的DNA。这种方法的核心是利用末端转移酶的功能，将核苷酸转移到双链DNA分子的突出或隐蔽的3'-OH上。以Mg作为辅助因子，该酶可以在突出的3'-OH端逐个添加单核苷酸，如果用Co作辅助因子则可在隐蔽的或平末端的3'-OH端逐个添加单个核苷酸。

步骤可参考各种试剂盒说明