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yabing0324

金虫 (职业作家)

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[交流] 【求助】感受态细胞制备

大家好！
我在震荡培养至OD600到0.5，后，分装到4个50ml离心管中，按照步骤要冰上放置10分钟，然后离心收集菌体，但是，由于离心机出了点问题，耽误了四十分钟，就是说在冰上放置了将近一个小时，才离心的，呜哇哇，不知道影响大吗？

[ Last edited by rainwander on 2011-1-6 at 17:40 ]

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1楼 2011-01-06 16:28:26

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srlee

铁杆木虫 (小有名气)

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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流 2011-01-07 10:09:59

引用回帖:

Originally posted by yabing0324 at 2011-01-06 21:58:40:

对呀，此话有理，本来我的OD就挺大了，这样该不好了，那么请问怎么才能检测一下我的感受态能用不？

感受态做完后检验一下转化效率呀，并做一下对照。其实感受态这东西也就是转化效率高低的问题而已，除非有特殊实验如建文库什么的需要较高要求的感受态（达到10次方），平时实验中一些小转化，实验室里随便做一下就足够用了。
做感受态一般用的是这种方法（Hioraki Inoue, Hiroshi Nojima and Hiroto Okayama, Transformation of E. coli with plasmids, Gene V.96 (1990), pp. 23-28.）分子克隆上也有，这些都是比较基础的，你自己看看充下电吧！当然，也有许多实验室有自己优化的制备感受态的方法，但大体都差不多。祝实验顺利！

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9楼2011-01-06 22:21:57

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susizheng

木虫 (著名写手)

yabing0324(金币+3):又快又好！ 2011-01-06 16:39:08

冰上放置时间越长越好。

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2楼2011-01-06 16:30:14

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srlee

铁杆木虫 (小有名气)

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★ ★
rainwander(金币+2):恩，多少会有一点点影响的，问题应该不大~~~ 2011-01-06 17:41:47
yabing0324(金币+1): 2011-01-06 21:59:23

引用回帖:

Originally posted by yabing0324 at 2011-01-06 16:28:26:
大家好！
我在震荡培养至OD600到0.5，后，分装到4个50ml离心管中，按照步骤要冰上放置10分钟，然后离心收集菌体，但是，由于离心机出了点问题，耽误了四十分钟，就是说在冰上放置了将近一个小时，才离心的，呜哇 ...

一般要求冰上放置30min，但是楼上说“冰上放置时间越长越好”令人费解，若冰上放置1h应该也没有什么问题，具体有没有影响可以做个试验对照一下看看，我觉得只是在冰上放置的过程中菌体仍在生长增值，OD值会变大一点点！

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3楼2011-01-06 17:25:59

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