[交流] 【求助/交流】求助重叠PCR的问题，有哪位高手能帮忙看看，不胜感激！ 已有1人参与

引物        5'-3' 1        GGAATTCAACTAGCTCTGCAATGACCT        （EcoRI） 2        GTCGATAATGTGATTCCATGACGTTGC      （斜体为互补序列） 3        GCAACGTCATGGAATCACATTATCGAC      （斜体为互补序列） 4        ACGCGTCGACTCAAGTTCTAGAATTAA          (SalI) ldh基因上游片段大小为518bp，下游片段为498bp 方法1、PCRmix 反应液 10µL    双蒸水：7µL    上下游引物各: 1 µL    ATCC13870的模板DNA 1 µL 加入Taq  DNA聚合酶0.2µL。混合后进行PCR反应 (94℃ 60 s，57℃ 50 s，72℃ 120 s)，经过30个循环后 再72℃延伸10 min。 方法2、上游片段A：518 bp；下游片段B：498 bp 然后：25微升体系（A：1µL，B：1µL，双蒸水：10µL，5U/µL Tap聚合酶：0.2µL，PCR Mix：13µL） 然后：95度，4min， 94度，55s 56度，40s 72度，1min 5个循环。 72度，2min 然后在72度，2min的过程中就再加入25微升补充体系，（引物1：1µL，引物4：1µL，双蒸水：10µL，5U/µL Tap聚合酶：0.2µL，PCR Mix：13µL ） 混合成50微升体系 95度，4min， 94度，50s 56度，40s 72度，1min 30个循环。 72度，10min 重叠PCR的结果照片上传了

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