| 查看: 664 | 回复: 1 | |||
[交流]
【求助/交流】求助重叠PCR的问题，有哪位高手能帮忙看看，不胜感激！ 已有1人参与
|
|
引物 5'-3' 1 GGAATTCAACTAGCTCTGCAATGACCT （EcoRI） 2 GTCGATAATGTGATTCCATGACGTTGC （斜体为互补序列） 3 GCAACGTCATGGAATCACATTATCGAC （斜体为互补序列） 4 ACGCGTCGACTCAAGTTCTAGAATTAA (SalI) ldh基因上游片段大小为518bp，下游片段为498bp 方法1、PCRmix 反应液 10µL 双蒸水：7µL 上下游引物各: 1 µL ATCC13870的模板DNA 1 µL 加入Taq DNA聚合酶0.2µL。混合后进行PCR反应 (94℃ 60 s，57℃ 50 s，72℃ 120 s)，经过30个循环后 再72℃延伸10 min。 方法2、上游片段A：518 bp；下游片段B：498 bp 然后：25微升体系（A：1µL，B：1µL，双蒸水：10µL，5U/µL Tap聚合酶：0.2µL，PCR Mix：13µL） 然后：95度，4min， 94度，55s 56度，40s 72度，1min 5个循环。 72度，2min 然后在72度，2min的过程中就再加入25微升补充体系，（引物1：1µL，引物4：1µL，双蒸水：10µL，5U/µL Tap聚合酶：0.2µL，PCR Mix：13µL ） 混合成50微升体系 95度，4min， 94度，50s 56度，40s 72度，1min 30个循环。 72度，10min 重叠PCR的结果照片上传了  |
回复此楼» 猜你喜欢
面上意见出来了
已经有10人回复
-
导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！
已经有9人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有5人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有7人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有10人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助各位大神！帮忙看下，我的RNA提取的怎么样。。。不胜感激！
已经有11人回复
- 关于邀稿论文的创新问题【求有经验的虫子帮忙 不胜感激】
已经有7人回复
- PCR引物怎么根据序列图设计啊？希望哪位大侠指导下，感激不尽
已经有5人回复
- 向高手求助，希望有机牛人能帮帮忙，小女不胜感激!!!!!
已经有8人回复
- 求助！！请高手看看这段英文有什么问题，帮忙改改，谢谢！！
已经有3人回复
- 求助，下面化学式的中英文名称，只有中文的也行。哪位大侠帮帮忙，小弟不胜感激。
已经有3人回复
- 紧急求助，求各位高手帮忙解决下以下问题，不胜感激！
已经有6人回复
- 【求助/交流】qPCR问题求助，请大家帮帮忙，谢谢
已经有5人回复
- 【求助】请高手帮忙,唾液酸可以和哪几种糖结合?不胜感激...
已经有3人回复
- 【求助】有关合成胶体聚合物微球的问题，希望高手指点，小弟不胜感激！
已经有4人回复
- 麻烦有心人帮忙看看这条意见是什么意思~~~不胜感激
已经有3人回复
- 求助！哪位大兄弟姐妹能帮帮小女子解决些关于chemofficed 问题啊，不胜感激！
已经有3人回复
Arrennew
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 7803.5
- 红花: 2
- 帖子: 301
- 在线: 122.9小时
- 虫号: 322853
- 注册: 2007-03-12
- 性别: GG
- 专业: 林木遗传育种学
2楼2010-12-31 20:56:37
10