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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶催化反应求助
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syn1985

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酶催化反应求助 已有2人参与

本人菜鸟一个，现在在做酶催化，以黄酮类物质作为底物，一个是杨梅素 一个是芒果苷。两个物质在水中的溶解性都不好，杨梅素溶于纯甲醇，加入水后就会析出，芒果苷溶于可稀甲醇。我做酶催化的时候在反应体系中用稀甲醇作为催化溶剂，随着催化反应的进行，甲醇不断地挥发，底物也就析出来了。同时酶在50%浓度的稀甲醇中活力时间不超过1h，活力很低。现在我很烦恼，不知道实验后面该怎么办，因为底物溶解性太低导致了产物量特别的低。有没有高手能帮帮我
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1楼 2010-12-29 10:34:42
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
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rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-29 17:28:30
不知道你用什么酶了。两相催化你可以尝试一下以下的方案：
固定化：太多的文献报道过将原本只能在水相里催化的酶固定化后在有机相内催化。重点在于如何选择载体和固定化方法是关键。而且你需要考虑固定化后的酶在有机相内还是在两相之间。
全细胞催化：这个同样有着广泛的应用。不过你需要考虑溶剂的细胞毒性（甲醇有点毒啊，^_^），细胞是否能够吸收底物并且释放出产物，有没有副反应的发生等等。
多看看别人如何做这个催化反应的
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2楼2010-12-29 11:48:02
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syn1985

木虫 (正式写手)
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Originally posted by lwiaanngg at 2010-12-29 11:48:02:
不知道你用什么酶了。两相催化你可以尝试一下以下的方案：
固定化：太多的文献报道过将原本只能在水相里催化的酶固定化后在有机相内催化。重点在于如何选择载体和固定化方法是关键。而且你需要考虑固定化后的酶在 ...

谢谢wiaanngg，我看过不少我这方面的催化内容，我用的是漆酶，有些文献里面写他们用丙酮和水，也有用DMSO和水，可是除DMSO实在是麻烦，还有用两相的，但是两相的有个问题就是溶氧量和有机相挥发的问题，因为如果敞口在摇床里面做，有机相会挥发，随着挥发底物也会析出，然后要不断地加有机相，如果用透气的封口膜（培养微生物用的）封口，有机相挥发会慢点，但是溶氧量肯定也会变差。
如果用全细胞催化，我这个酶是微生物生产的细胞外酶，如果直接用微生物发酵液催化的话，会存在很大程度的鉴定问题，我那柱菌的次生代谢产物太复杂，很多大的化合物。
所以自己现在不知道实验该怎么做了
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3楼2010-12-29 13:00:09
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
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rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-29 17:28:44
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Originally posted by syn1985 at 2010-12-29 13:00:09:

谢谢wiaanngg，我看过不少我这方面的催化内容，我用的是漆酶，有些文献里面写他们用丙酮和水，也有用DMSO和水，可是除DMSO实在是麻烦，还有用两相的，但是两相的有个问题就是溶氧量和有机相挥发的问题，因为如果 ...

你或试试使用surface display在你的微生物上
先试试了，单单讨论的话无法解决目前的问题。毕竟需要靠实验数据来说话的
祝你好运了
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4楼2010-12-29 13:34:56
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syn1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lwiaanngg at 2010-12-29 13:34:56:


你或试试使用surface display在你的微生物上
先试试了，单单讨论的话无法解决目前的问题。毕竟需要靠实验数据来说话的
祝你好运了

谢谢
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5楼2010-12-29 15:39:23
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