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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】今天做的Rea Time PCR怎么看不到融解曲线？是不是前面设置出现了问题？
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】今天做的Rea Time PCR怎么看不到融解曲线？是不是前面设置出现了问题？

如题，设置界面和融解曲线界面如图
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1楼 2010-12-17 18:46:43
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
7300的机器没用过，不过你确定Stage 3那里有设连续读取荧光吗？
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2楼2010-12-17 18:48:43
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-17 18:48:43:
7300的机器没用过，不过你确定Stage 3那里有设连续读取荧光吗？

现在我设的是在Stage 2那里连续读取，你说的跟Data Collection 是不是一个意思a
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3楼2010-12-17 19:01:50
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3):鼓励发帖交流！ 2010-12-17 20:23:13
引用回帖:
Originally posted by dovekaoyan at 2010-12-17 19:01:50:



现在我设的是在Stage 2那里连续读取，你说的跟Data Collection 是不是一个意思a

stage 3当然也要读了，是在升温的step读
因为我没用过7300所以没也办法直接解释

简单而言，前面的扩增定量阶段，是所谓的点读取，就是在延伸的最后一刻读取一个值即可

而melting curve的话，是在复性后缓慢升温的阶段连续读取，得到一串值描绘荧光曲线，再求负导数得到溶解曲线
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4楼2010-12-17 19:07:32
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-17 19:07:32:


stage 3当然也要读了，是在升温的step读
因为我没用过7300所以没也办法直接解释

简单而言，前面的扩增定量阶段，是所谓的点读取，就是在延伸的最后一刻读取一个值即可

而melting curve的话，是在复性后 ...

但是好像不能设置两个data collection 点，我第一次是选择在stage 3结果看不到扩增曲线
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5楼2010-12-17 19:17:40
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by dovekaoyan at 2010-12-17 19:17:40:


但是好像不能设置两个data collection 点，我第一次是选择在stage 3结果看不到扩增曲线

囧……这是神马仪器……或许你问问ABI的技术支持吧
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6楼2010-12-17 19:24:08
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sutao1979

木虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-18 09:13:05
设置有问题，好好看看protocol吧
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7楼2010-12-18 00:35:00
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yydopcr

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-18 13:56:23
dovekaoyan(金币+5):多谢，我马上就试试 2010-12-19 11:19:07
7300用过，不过好像你那个第三步是你自己设置的吧，没有读荧光，这个是不对的。你可以直接用add dissociation stage, 如果我没有记错的话会直接显示dissociation stage， 而不是stage 3。

[ Last edited by yydopcr on 2010-12-18 at 13:20 ]
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8楼2010-12-18 13:18:24
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yydopcr at 2010-12-18 13:18:24:
7300用过，不过好像你那个第三步是你自己设置的吧，没有读荧光，这个是不对的。你可以直接用add dissociation stage, 如果我没有记错的话会直接显示dissociation stage， 而不是stage 3。

[ Last edited by y ...

多谢！！！
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9楼2010-12-19 11:15:04
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