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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】今天做的Rea Time PCR怎么看不到融解曲线?是不是前面设置出现了问题?

如题,设置界面和融解曲线界面如图

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
7300的机器没用过,不过你确定Stage 3那里有设连续读取荧光吗?
2楼2010-12-17 18:48:43
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-17 18:48:43:
7300的机器没用过,不过你确定Stage 3那里有设连续读取荧光吗?

现在我设的是在Stage 2那里连续读取,你说的跟Data Collection 是不是一个意思a
3楼2010-12-17 19:01:50
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★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3):鼓励发帖交流! 2010-12-17 20:23:13
引用回帖:
Originally posted by dovekaoyan at 2010-12-17 19:01:50:



现在我设的是在Stage 2那里连续读取,你说的跟Data Collection 是不是一个意思a

stage 3当然也要读了,是在升温的step读
因为我没用过7300所以没也办法直接解释

简单而言,前面的扩增定量阶段,是所谓的点读取,就是在延伸的最后一刻读取一个值即可

而melting curve的话,是在复性后缓慢升温的阶段连续读取,得到一串值描绘荧光曲线,再求负导数得到溶解曲线
4楼2010-12-17 19:07:32
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-17 19:07:32:


stage 3当然也要读了,是在升温的step读
因为我没用过7300所以没也办法直接解释

简单而言,前面的扩增定量阶段,是所谓的点读取,就是在延伸的最后一刻读取一个值即可

而melting curve的话,是在复性后 ...

但是好像不能设置两个data collection 点,我第一次是选择在stage 3结果看不到扩增曲线
5楼2010-12-17 19:17:40
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引用回帖:
Originally posted by dovekaoyan at 2010-12-17 19:17:40:


但是好像不能设置两个data collection 点,我第一次是选择在stage 3结果看不到扩增曲线

囧……这是神马仪器……或许你问问ABI的技术支持吧
6楼2010-12-17 19:24:08
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sutao1979

木虫 (著名写手)



rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-18 09:13:05
设置有问题,好好看看protocol吧
7楼2010-12-18 00:35:00
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yydopcr

铜虫 (小有名气)


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dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-18 13:56:23
dovekaoyan(金币+5):多谢,我马上就试试 2010-12-19 11:19:07
7300用过,不过好像你那个第三步是你自己设置的吧,没有读荧光,这个是不对的。你可以直接用add dissociation stage, 如果我没有记错的话会直接显示dissociation stage, 而不是stage 3。

[ Last edited by yydopcr on 2010-12-18 at 13:20 ]
8楼2010-12-18 13:18:24
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by yydopcr at 2010-12-18 13:18:24:
7300用过,不过好像你那个第三步是你自己设置的吧,没有读荧光,这个是不对的。你可以直接用add dissociation stage, 如果我没有记错的话会直接显示dissociation stage, 而不是stage 3。

[ Last edited by y ...

多谢!!!
9楼2010-12-19 11:15:04
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