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新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】提取DNA 已有3人参与

请问：在提取DNA时，细胞裂解液的pH值7.8会不会对RNAase A和蛋白酶K有没有影响，不知道为什么我加了RNAase A后提取的DNA的电泳图里还是有RNA(100bp)的片段。

1楼 2010-12-12 15:41:47

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木虫 (正式写手)

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1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-12-12 20:47:14

提取液里有强变性剂，而且直接抽提除蛋白的话，RNase活性的残留比较小。最好是在得到核酸水溶液之后用RNase处理，或者最后用含RNase的水溶解

3楼2010-12-12 18:35:17

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金虫 (著名写手)

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dhd997(金币+2):good 2010-12-12 18:05:34

这个pH值是不会影响蛋白酶K的活性的. 也只有在pH 8.0左右蛋白酶K的活性最高.
还有100bp的RNA片段???晕了....
贴图上来.

2楼2010-12-12 16:31:24

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银虫 (正式写手)

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1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-12-12 20:47:25

RNA只有100bp 应该是5S（非乙醛变性胶，RNA的分子量不能单靠Marker来确定，只是一个大概值）。你提DNA做什么，没很高要求的话，5SRNA不影响的。
想除去的话，把提取的DNA酚氯仿处理下就好，TRIS酚质量没问题的话，直接把RNA降解了。

4楼2010-12-12 18:57:29

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