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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】凝胶电泳--EB什么时候加
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1楼 2010-11-26 12:51:00
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hyw1989960

木虫 (正式写手)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
煮完以后，等冷却到60度（不烫手）时候加，加完以后倒胶，
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7楼2010-11-26 14:36:01
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普通回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
wickhamhan(金币+1): 2010-11-26 12:54:46
都可以的，看你习惯了，实验室是制胶时加，
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2楼2010-11-26 12:53:28
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feng__

金虫 (著名写手)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
我们都是配胶的时候加！

溶好后冷却到不烫手，加入EB，混匀，倒胶！
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3楼2010-11-26 13:12:14
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墨香若水

木虫 (著名写手)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
加在胶里面
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4楼2010-11-26 13:12:54
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lyfei999

金虫 (正式写手)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
冷却后加
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5楼2010-11-26 14:18:08
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jykjt

木虫 (正式写手)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
制胶时加
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6楼2010-11-26 14:29:53
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一碗水端平

木虫 (职业作家)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
直接加到凝胶中
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8楼2010-11-26 15:09:53
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kevinxin

禁虫 (小有名气)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
9楼2010-11-26 15:19:02
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+2):正解 2010-11-26 15:43:26
是的
等胶冷却到大约60度加EB摇匀就行了
注意温度哦
大高了，对EB不好
太低了，胶就开始凝了，EB可能摇不匀的
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10楼2010-11-26 15:31:18
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wsmcc

金虫 (小有名气)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
都可以的。提前加进去的话效果比较好，如果是验证之类的，跑完电泳跑胶也挺好的，虽然效果不如直接加到胶里好，但是我觉得更安全些。毕竟EB加热会分解的。
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11楼2010-11-26 15:37:54
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-11-26 23:24:20
引用回帖:
Originally posted by wickhamhan at 2010-11-26 12:51:00:
大家做琼脂糖凝胶电泳时，是EB加入到工作液中，还是跑完电泳再在EB中染色？哪种效果好？

现在很多实验室基本上都是将EB或者goldview加到胶里，跑完电泳甚至在可见光下也可以看到条带，方便。
但以前都是先跑胶，然后在EB溶液里染色，这样既减少了污染，还具有较高的分辨率，但是操作比较繁琐。

现在我们实验室对敏感性比较高的PFGE还是用EB来染色，普通的电泳是将Goldview直接加到胶里。
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12楼2010-11-26 16:51:53
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
LS说的是，之前实验室就是跑胶的地方为非隔离区，有块隔离区用来跑完后用EB溶液浸泡15分钟左右，照相。现在用一种花青素类的东西。是和LOADINGBUFFER 一起加的跑的。
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13楼2010-11-26 17:08:15
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
都可以

DNA电泳染色可以分为  点染，胶染，泡染，不懂就百度一下，这是基本常识
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14楼2010-11-26 17:31:12
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
一般就是配胶时添加的，不过用EB时可要注意啊~我们实验室现在用goldview，低毒！
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15楼2010-11-26 17:50:17
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
可以跑完电泳染，也可以在倒胶的时候加。
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16楼2010-11-26 17:52:12
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lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
我们是跑完胶染色
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17楼2010-11-26 19:48:47
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dy_414

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+3):有意思~ 2010-11-26 23:25:14
溶胶的玻璃瓶在戴着乳胶手套和PE手套的手背上可以停留7秒（皮糙肉厚的男生）或5秒（细皮嫩肉的女生）以上，就是默认<60℃，这时候可以加EB了
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18楼2010-11-26 22:10:15
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ccz3099

金虫 (正式写手)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
加在胶里面
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19楼2010-11-26 23:11:45
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云横秦岭

铁杆木虫 (正式写手)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
跑完胶，再加染色，污染少
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20楼2010-11-26 23:31:11
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玉米虫

银虫 (小有名气)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
制胶过程中加，冷却到不是很烫手的时候加。加早了EB要挥发出来
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21楼2010-11-26 23:39:12
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tigertang

木虫 (著名写手)
★ ★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-27 08:41:30
经典的方法是跑完胶后，用EB染胶
通常的做法就是制胶时，在倒胶前加到胶里或直接加到电泳液里

经典方法的好处是实验室比较好控制EB的污染，但对于高浓度的胶（>2%）效果不好。
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23楼2010-11-27 00:50:27
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
其实加那里都管用，只要时刻记得EB对皮肤有致癌性就可以了。我们以前都有徒手做的，非常佩服！
现在有一种信号更强烈的染料替代物，不过后来听说也是有点致癌性的。
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24楼2010-11-27 11:05:16
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lixiaomin8611

金虫 (初入文坛)
★
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
一般是制胶时加，感觉这样效果比较好，不过也要等胶冷却至无蒸汽，以免EB随之蒸发~弄得空气中有毒就不好了~~
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25楼2010-11-27 14:12:40
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wmqouc

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
也就是前染和后染了
其实效果差不多
后染污染的区域比前染小一些
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26楼2010-11-28 15:06:46
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)

加到胶里会比较好些

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):鼓励新虫参与 2010-11-29 12:04:01
配好胶后，稍冷却后，用枪加一点就行，然后摇匀、倒胶。
注意eb致癌，小心。
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27楼2010-11-29 10:42:35
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taotao4108

金虫 (正式写手)
还是换掉吧，现在很少有实验室还用EB了，我们以前都用GelRed，挺不错的，好用不贵，对人没有伤害
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28楼2010-11-30 12:47:08
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们是跑完电泳后再染色的，效果差不多，但是要注意染色时间要长。
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29楼2010-11-30 13:25:52
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clare420

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以做胶的时候加在胶里，大概50-60度的时候加，或者在样品里加也可以，就是样品，loading,EB加在一起，再点到胶孔里
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30楼2010-11-30 15:54:19
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yixinyuan

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们都是制胶时候加入EB的，凝胶冷却不烫时候加入摇匀倒入制胶槽。
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31楼2010-12-04 19:51:10
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简单回复
chentao332022楼
2010-11-26 23:44   回复  
wickhamhan(金币+1):谢谢参与
 
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