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mmsong1987

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教试剂瓶等灭菌的包装

本人是学化学的，没有接受过正规的细胞培养操作培训，想请教一些关于细胞培养问题，期生物的同学能给解答疑问，多谢！

1. 像玻璃培养瓶，蓝盖试剂瓶之类的，高压灭菌前要怎样包装呢？如果只是把瓶口稍微拧松让蒸汽进去等灭菌结束后直接把瓶盖拧紧，那么瓶内蒸汽冷凝后形成的水珠怎么办呢？放在鼓风干燥箱里烘干的话怎么保证箱体内的空气不会导致灭过的瓶子二次污染呢？看到有人说用8层纱布，要整体都包住吗？这样的话大的1L的蓝盖瓶岂不是要专门缝个纱布袋了？

2. 分装培养基的时候，是在过膜之前先用量筒分装成200 mL等不同的体积后再过滤吗？因为滤过之后又要一批瓶子，这样每次都要准备两个批量的瓶子，是这样吗？另外，把这些分装好后的瓶子喷过酒精直接拿到超净台里进行过滤操作，这样打开瓶口后，瓶内的细菌不就留在超净台内了吗？

3. 那些国产的针头滤器，据说可以重复利用，是直接把微孔滤膜装在滤器后用纱布之类的包好放在灭菌锅里灭菌，然后就可以直接滤胰酶之类的了吗？因为是新手，一切还在学习阶段，实验室经费也不是很宽裕，不好意思刚开始就拿那种无菌包装的练习。

4. 四季青的血清要灭活吗？看网上搜出来的结果是各式各样的，我们主要是用来做传代细胞的培养，大多是肿瘤细胞。

5. 细胞冻存是不是只在-80度冰箱就可以短期保存，比如2~3个月之久。冻存细胞的液氮罐记得都有能放冻存管的格子，跟化学用的不大一样，应该买什么样的液氮罐啊，什么厂家产的好呢？
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1楼2010-11-22 15:22:13
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Rubisco580

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5):感谢回复，欢迎常来生物版做客 2010-11-22 16:54:14
mmsong1987(金币+10):谢谢，以后还请多指教！ 2010-11-22 19:26:51
你问我答：
1.我们灭菌这些瓶子的时候包六层纱布加报纸或者只包报纸，包住瓶盖就行了。灭菌后在超净台吹干，第二天过滤培养基加入瓶中。瓶盖拧松后空气中的污染是不会进入瓶内的，否则怎么敢在培养细胞的时候拧松瓶盖呢？若是培养细胞的培养瓶，可以4～6个一组包于报纸中，烘箱烘干即可。
2.我不明白楼主干嘛准备两批瓶子。过滤前的瓶子不需要无菌，只要保证过滤后装培养基的瓶子无菌就行。也可以不拿进超净台，每次吸到注射器里面，把注射器拿进去不就行了？
3.我们使用的国产针头滤器，装了滤膜后放在铝制饭盒内，用报纸包好饭盒拿去灭菌的。灭菌后烘干使用。
4.四季青的血清我们是灭活的，水浴56摄氏度30分钟。
5.－80度可以保存细胞一阵，但还是推荐液氮。液氮罐可以用Thermo什么的，质量一定要好。不然几十上百升液氮泄露，也很恐怖的。

[ Last edited by Rubisco580 on 2010-11-22 at 16:39 ]
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2楼2010-11-22 16:36:12
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mmsong1987

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by Rubisco580 at 2010-11-22 16:36:12:
你问我答：
1.我们灭菌这些瓶子的时候包六层纱布加报纸或者只包报纸，包住瓶盖就行了。灭菌后在超净台吹干，第二天过滤培养基加入瓶中。瓶盖拧松后空气中的污染是不会进入瓶内的，否则怎么敢在培养细胞的时候拧松 ...

非常感谢你的回答，学习了很多，还是有些细节问题想确认一下

装滤过的培养基的试剂瓶瓶口是先用六层纱布包好最外层再用报纸吗？从灭菌锅里取出后直接放到超净台吹干吗？从灭菌锅到超净台的途中有什么注意事项呢？瓶盖一直是拧松状态吗？

玻璃培养瓶的瓶盖也是瓶口用6层纱布包好然后4~6个一组用报纸之类的包下灭菌，灭完了之后直接取出放烘箱中烘干？瓶口的盖子也是一直旋松状态的？烘干之后盖子该旋紧了吧？

关于培养基的过滤，我们用的是别的老师送的一个不锈钢正压滤器，我每次是直接拿用量筒分装好的装培养基的蓝盖试剂瓶外面喷点酒精然后直接导入滤器中的，然后用一个加压球（血压球，就是跟量血压用的那个差不多，流速还行）加压让滤液流出的，出口是灭过的瓶子。不知道你说的“也可以不拿进超净台，每次吸到注射器里面，直接注射器进去”有些不解？培养基一次都配1L，用注射器加针头滤器不是很慢吗？

另外，怀疑染菌的加过血清的培养基除了扔掉还有别的补救措施没？
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3楼2010-11-22 19:25:41
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Rubisco580

金虫 (小有名气)
mmsong1987(金币+10):谢谢 2010-11-23 10:41:10
六层纱布和报纸在一起，大小一样或者报纸大一点，然后橡皮筋捆紧。灭菌后取出时拧紧与否关系不大，刚拿出来很烫还是别拧了。在超净台里面吹的时候也是拧松的。

玻璃培养瓶瓶口无需包纱布，只要这组瓶子都包在报纸里面就行。瓶盖一直是松的，包括养细胞的时候，不然细胞憋死了……当然，你观察细胞的时候拧紧，免得洒了。

注射器用在胰酶之类的体积不太大的液体灭菌。进过滤器前的东西，不需要刻意喷酒精，因为你的培养基也不是无菌的嘛。我们也用的正压滤器，用长的塑料管将培养基导入滤器。我们的培养基是放在2L烧杯里的，烧杯就放在超净台外面。如果你的导管够长，也可以这么做。

怀疑染菌的培养基可以取一点在培养瓶中养，看看会不会长菌。补救措施嘛，加抗生素或许可以，但是不推荐，还是扔掉保险，万一处理的不够干净污染了细胞就麻烦了。
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4楼2010-11-23 10:01:14
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