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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】谁会gene waling操作？能不能发一份完整的实验步骤、
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zhanglin_84

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】谁会gene waling操作？能不能发一份完整的实验步骤、已有9人参与

各位大牛
谁会gene walking操作？能不能发一份完整的实验步骤？
您们一般用什么进行引物设计？
谢谢

[ Last edited by zhanglin_84 on 2010-11-21 at 10:04 ]
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1楼2010-11-21 09:55:13
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adslye

银虫 (正式写手)
★ ★
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amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-11-21 16:27:28
是不是打错字了 ?genomic walkiing 吧.
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2楼2010-11-21 10:01:06
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wangy0908

金虫 (正式写手)
★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-11-21 10:08:21
这个有试剂盒用的啊。但是用试剂盒的话需要知道你的基因里面是否富含GC，如果GC太高了的话就不行的。方法很多的，但是都有个共同点就是最好知道你的一段基因的侧翼序列
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3楼2010-11-21 10:03:01
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zhanglin_84

木虫 (正式写手)
不好意思
字打错了
富含GC，它的比例为多少称为富含？？
如果是富含
用什么方法做了？？
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4楼2010-11-21 10:05:54
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adslye

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
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amisking(金币+4):good！ 2010-11-21 16:27:35
引用回帖:
Originally posted by zhanglin_84 at 2010-11-21 10:05:54:
不好意思
字打错了
富含GC，它的比例为多少称为富含？？
如果是富含
用什么方法做了？？

富含GC你先不用考虑，先理解实验。
你看看这个试剂盒的说明书吧：http://www.docin.com/p-1308436.html
不过不建议你买takara的这个kit。我在用，效果不好~
推荐用 BD UniversalGenomeWalker kit  这个会好很多！我的序列就是用这个拿的。说明书网上有，你可以自己找来看。

takara是中文说明书，你先看，理解下再看BD的，BD的是英文的，很详细。原理差不多的，只是接头片段设计思路和PCR策略不同。

你要拿侧翼序列也可以用：inverse PCR ,Tail PCR 。

先理解原理，不要急着拿方案。
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5楼2010-11-21 11:11:27
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zhanglin_84

木虫 (正式写手)
主要是引物麻烦，
您一般用什么设计？？？

[ Last edited by zhanglin_84 on 2010-11-21 at 13:03 ]
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6楼2010-11-21 12:39:02
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zhanglin_84

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-11-21 11:11:27:


富含GC你先不用考虑，先理解实验。
你看看这个试剂盒的说明书吧：http://www.docin.com/p-1308436.html
不过不建议你买takara的这个kit。我在用，效果不好~
推荐用 BD UniversalGenomeWalker k ...

您的引物怎么设计的??
主要引物这块遇到麻烦
不会设计
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7楼2010-11-21 13:07:12
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adslye

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
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amisking(金币+2):good！ 2010-11-21 16:27:42
引用回帖:
Originally posted by zhanglin_84 at 2010-11-21 13:07:12:

您的引物怎么设计的??
主要引物这块遇到麻烦
不会设计

常用那几款软件都行，你按kit要求来就好，没什么难的。不放心多设计几条。
建议：1，不要太靠近已知序列边缘，这样测序结果不好比对。
         2，把特异性放在第一考虑的。这个实验杂带相当多。
如果设计引物不懂。。。那自己找教程吧。。。。

总之，不放心就多设计点，反正引物不贵，别把时间浪费在引物上。其实已知序列可找的范围最多1.5kb 。能对应的好引物没有几条。你都设计了就好。
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8楼2010-11-21 14:56:51
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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scelab(金币+2):兄弟，推荐几篇简单点的文献啊 2010-11-21 23:49:55
我没用过试剂盒，直接按照文献就克隆出目的基因了,SiteFinding PCR. 另外还有很多，TAIL PCR, Inverse PCR，Panhandle PCR。文献太多了。
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9楼2010-11-21 20:14:28
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shuxian1

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
到螺旋网上去转转，那上面专门有一堂课是讲染色体步移的
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我与你一起闯天下
10楼2010-11-21 21:00:08
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