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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何菌类鉴定
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jasonchong

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】如何菌类鉴定 已有4人参与

我们从老鼠内脏提取到细菌，我们要鉴定是什么细菌要做些什么过程呢？我是新人也查了些文献，这菌是好氧的，杆菌，革兰氏染为红色，我们提取到的菌可能是混合菌，要进行纯化（怎么纯化比较好），测定16sRNA，设计引物（不知道序列怎么设计啊？依据其他文献的引物可以吗？），谢谢各位，如果要知道的可以讨论或者赐教，我刚触及这方面的知识不是太了解，虽然自己也有看文献，希望有经验的各位能给我点帮助，谢谢
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无
1楼 2010-11-12 13:17:02
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j2

木虫 (正式写手)
★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-12 15:27:07
测定16srDNA，用通用引物就是了，随便你用哪一对都可以。
要纯化的话，将平板上各种样子的单个菌落再划平板，起码要在平板上是一种样子，镜下也只有一种样子。你怀疑是什么菌可以用那种菌的选择性平板。分离纯菌后做生化鉴定就是了。不一定非要16s不可。
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
2楼2010-11-12 14:04:23
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fangcaiyuan

金虫 (正式写手)
★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-12 15:27:14
纯化最好的方法是划线分离，将你分离得到菌在平板上划线，尽量划得很开，是不是一种菌就一目了然了，你以后的操作就是挑取纯培养的菌落提取16SrDNA之后测序，细菌有通用的16SrDNA引物，上网搜细菌通用引物估计就能搜到了，之后测序的结果到ncbi进行比对或构建进化树就好了
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3楼2010-11-12 14:04:49
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gao-feng

铁杆木虫 (著名写手)

疯子
★
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先做形态学的观察，再做生理生化实验，最后测16SrDNA序列，比对数据库。
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开开心心做科研，踏踏实实做好人。
4楼2010-11-12 14:50:39
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jasonchong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by j2 at 2010-11-12 14:04:23:
测定16srDNA，用通用引物就是了，随便你用哪一对都可以。
要纯化的话，将平板上各种样子的单个菌落再划平板，起码要在平板上是一种样子，镜下也只有一种样子。你怀疑是什么菌可以用那种菌的选择性平板。分离纯菌 ...

对16s进行PCR后，要进行转化之类的，有具体点的步骤吗？我好好学习下，文献上对这个不是很详细，谢谢
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无
5楼2010-11-12 18:17:25
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jasonchong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by fangcaiyuan at 2010-11-12 14:04:49:
纯化最好的方法是划线分离，将你分离得到菌在平板上划线，尽量划得很开，是不是一种菌就一目了然了，你以后的操作就是挑取纯培养的菌落提取16SrDNA之后测序，细菌有通用的16SrDNA引物，上网搜细菌通用引物估计就能 ...

对16s进行PCR后，要进行转化之类的，有具体点的步骤吗？我好好学习下，文献上对这个不是很详细，谢谢
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无
6楼2010-11-12 18:17:36
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j2

木虫 (正式写手)
★
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可以直接拿PCR产物测序的，不用非要转化不可
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
7楼2010-11-12 18:20:12
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jasonchong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by j2 at 2010-11-12 18:20:12:
可以直接拿PCR产物测序的，不用非要转化不可

我们设计引物让公司给合成，拿回来自己再PCR的，听说转化是全序列，不转化是测部分序列，是这样吗？望赐教
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无
8楼2010-11-12 18:29:57
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j2

木虫 (正式写手)
★ ★
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silicare(金币+1):一般600-900 2010-11-13 11:46:24
一般测序是测前800，你让他给你通测吧
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
9楼2010-11-13 10:46:13
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jasonchong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by j2 at 2010-11-13 10:46:13:
一般测序是测前800，你让他给你通测吧

那以后paper还怎么写啊
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无
10楼2010-11-13 18:19:55
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