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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助分子生物学问题
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caojinxuan

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求助分子生物学问题 已有4人参与

我想将2个基因串联，然后进行扩增，扩增产物为2个基因的串联序列，请问该怎么操作？
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累事经年，仰天啸月间情感俱伤 纵马横川，剑指远峰处星河灿烂
1楼 2010-11-09 22:18:08
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wxf8470

木虫 (小有名气)
★
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体外将两个片断连接，回收，PCR.
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2楼2010-11-10 00:53:30
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caojinxuan

银虫 (正式写手)
请问楼上这位能说具体点吗？体外怎么连接？
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累事经年，仰天啸月间情感俱伤 纵马横川，剑指远峰处星河灿烂
3楼2010-11-10 14:46:32
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liyong1981

金虫 (正式写手)
得有相关的载体吧
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4楼2010-11-10 14:50:29
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3):good 2010-11-10 16:10:37
只通过pcr的方法来解决你的问题：假设你的两条基因分别命名为A,B，且要按顺序串联，最终得到的片段命名为AB。
（1）设立一对引物，其中正向引物的设法是：引物的前半部分为A片段的最后20-25个碱基，引物的后半部分为B片段的最前端的15-20个碱基；设反向引物的原理与此相同，楼主自己想想该怎么设。
（2）扩增片段：用A的首引物和刚才设定的反向引物来扩增A片段，同理，用刚设定的正向引物和B的尾引物来扩增B片段。那么所得到的两个新片段都含有一段相同的overlap
（3）以新得到的两个片段为模板，用A的首引物和B得尾引物做PCR，即可得到你想要的序列
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5楼2010-11-10 15:07:33
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wxf8470

木虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by caojinxuan at 2010-11-10 14:46:32:
请问楼上这位能说具体点吗？体外怎么连接？

在末端引入相同的梅切位点，梅切后连接，之后跑胶，理论上会有5条带（1条正确的，两条自连，两条未连）回收大小正确的带。
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6楼2010-11-11 04:20:11
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