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caojinxuan

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求助分子生物学问题 已有4人参与

我想将2个基因串联,然后进行扩增,扩增产物为2个基因的串联序列,请问该怎么操作?
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wxf8470

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
体外将两个片断连接,回收,PCR.
2楼2010-11-10 00:53:30
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caojinxuan

银虫 (正式写手)

请问楼上这位能说具体点吗?体外怎么连接?
累事经年,仰天啸月间情感俱伤 纵马横川,剑指远峰处星河灿烂
3楼2010-11-10 14:46:32
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liyong1981

金虫 (正式写手)


得有相关的载体吧
4楼2010-11-10 14:50:29
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):good 2010-11-10 16:10:37
只通过pcr的方法来解决你的问题:假设你的两条基因分别命名为A,B,且要按顺序串联,最终得到的片段命名为AB。
(1)设立一对引物,其中正向引物的设法是:引物的前半部分为A片段的最后20-25个碱基,引物的后半部分为B片段的最前端的15-20个碱基;设反向引物的原理与此相同,楼主自己想想该怎么设。
(2)扩增片段:用A的首引物和刚才设定的反向引物来扩增A片段,同理,用刚设定的正向引物和B的尾引物来扩增B片段。那么所得到的两个新片段都含有一段相同的overlap
(3)以新得到的两个片段为模板,用A的首引物和B得尾引物做PCR,即可得到你想要的序列
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
5楼2010-11-10 15:07:33
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wxf8470

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by caojinxuan at 2010-11-10 14:46:32:
请问楼上这位能说具体点吗?体外怎么连接?

在末端引入相同的梅切位点,梅切后连接,之后跑胶,理论上会有5条带(1条正确的,两条自连,两条未连)回收大小正确的带。
6楼2010-11-11 04:20:11
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