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不转录的DNA

金虫 (小有名气)


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首先,你需要将你的蛋白溶解!然后加热处理之后电泳,电泳之后染色,通过相关仪器或者直接相机照相,利用bandscan来估计蛋白纯度!
2. 如果你想利用SDS-PAGE来测定蛋白浓度话,建议你在电泳时,在你蛋白旁边的泳道点一个BSA梯度(BSA浓度是确定的!例如你配一个0.5mg/ml),分别点1ug,2ug,4ug,6ug,8ug,10ug!电泳之后照相,利用PS,根据BSA比对的方法!首先将BSA的标准曲线做出来,然后根据你的protein的累计密度计算出他的质量,进而算出他的浓度!这种做法比一般的BSA比对方法可能更准确点!但是,利用SDS-page来测定蛋白浓度只是定性实验,如果想准确定量测定,建议你还是换bradford法或UV280等方法!

好吧,就这么多吧,希望对你有用!
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
21楼2013-05-25 08:29:31
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)


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SDS-PAGE是一条清晰的带,也顶多是电泳纯,还不如就直接用质谱。MADLI-MS还能够直接检测出四级结构或者蛋白质-蛋白质相互作用的存在。SDS-PAGE不能够直接检测出四级结构或者蛋白质-蛋白质相互作用的存在。
22楼2013-06-15 18:47:31
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王晓娟

铜虫 (正式写手)


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引用回帖:
11楼: Originally posted by hzxizh at 2010-11-03 22:45:52
要测纯度,建议15%的分离胶电泳;但最好用HPLC。
要测浓度,建议BSA标定曲线,用福林酚法测定。不要有电泳估算蛋白浓度。

请问假如跑完胶后,要利用亮度估测蛋白含量,怎么做呢?谢啦~
23楼2013-07-10 12:09:34
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