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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE检测蛋白纯度
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先，你需要将你的蛋白溶解！然后加热处理之后电泳，电泳之后染色，通过相关仪器或者直接相机照相，利用bandscan来估计蛋白纯度！
2. 如果你想利用SDS-PAGE来测定蛋白浓度话，建议你在电泳时，在你蛋白旁边的泳道点一个BSA梯度（BSA浓度是确定的！例如你配一个0.5mg/ml），分别点1ug,2ug,4ug,6ug,8ug,10ug！电泳之后照相，利用PS，根据BSA比对的方法！首先将BSA的标准曲线做出来，然后根据你的protein的累计密度计算出他的质量，进而算出他的浓度！这种做法比一般的BSA比对方法可能更准确点！但是，利用SDS-page来测定蛋白浓度只是定性实验，如果想准确定量测定，建议你还是换bradford法或UV280等方法！

好吧，就这么多吧，希望对你有用！
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长得比我英俊的，没我有才华！有才华的，没我长得俊！
21楼2013-05-25 08:29:31
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
SDS-PAGE是一条清晰的带，也顶多是电泳纯，还不如就直接用质谱。MADLI-MS还能够直接检测出四级结构或者蛋白质-蛋白质相互作用的存在。SDS-PAGE不能够直接检测出四级结构或者蛋白质-蛋白质相互作用的存在。
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22楼2013-06-15 18:47:31
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王晓娟

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by hzxizh at 2010-11-03 22:45:52
要测纯度，建议15%的分离胶电泳；但最好用HPLC。
要测浓度，建议BSA标定曲线，用福林酚法测定。不要有电泳估算蛋白浓度。

请问假如跑完胶后，要利用亮度估测蛋白含量，怎么做呢？谢啦~
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23楼2013-07-10 12:09:34
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