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hzxizh

铁杆木虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-03 23:33:30
要测纯度,建议15%的分离胶电泳;但最好用HPLC。
要测浓度,建议BSA标定曲线,用福林酚法测定。不要有电泳估算蛋白浓度。
11楼2010-11-03 22:45:52
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求知的学生

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by hzxizh at 2010-11-03 22:45:52:
要测纯度,建议15%的分离胶电泳;但最好用HPLC。
要测浓度,建议BSA标定曲线,用福林酚法测定。不要有电泳估算蛋白浓度。

条件所限 只能用SDS-PAGE试试 多谢解答
12楼2010-11-04 19:43:48
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hzxizh

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-05 08:39:57
既然是冻干粉,就会有些别的赋形剂或保护剂成分。实验前,一定要考虑这些物质的干扰。先搞清是什么东东,去做空白对照!
13楼2010-11-05 07:05:22
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求知的学生

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by hzxizh at 2010-11-05 07:05:22:
既然是冻干粉,就会有些别的赋形剂或保护剂成分。实验前,一定要考虑这些物质的干扰。先搞清是什么东东,去做空白对照!

多谢提醒!
14楼2010-11-05 15:50:23
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milamiya

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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15楼2012-07-13 10:25:39
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隔岸之雨

银虫 (小有名气)


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3楼: Originally posted by lxj341401 at 2010-11-03 14:21:56
蛋白粉加LOADING BUFFER后加热处理,再SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝或者银染,检测纯度。测浓度的话用考马斯亮蓝G250法595nm测定好了。具体操作一般的实验书上都有的。

你好,测海带的蛋白质含量,冻干之后,可以直接用考马斯亮蓝G250法么?
蛋白粉加LOADING BUFFER后加热处理,再SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝或者银染,检测纯度,,
这里电泳是干什么的,,求解。。
16楼2013-05-24 06:15:34
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隔岸之雨

银虫 (小有名气)


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13楼: Originally posted by hzxizh at 2010-11-05 07:05:22
既然是冻干粉,就会有些别的赋形剂或保护剂成分。实验前,一定要考虑这些物质的干扰。先搞清是什么东东,去做空白对照!

求问,冻干粉,不能直接用考马斯亮蓝测蛋白质含量么,,我测海带的, 是新鲜的海带测,还是先烘干再用考马斯亮蓝测?
17楼2013-05-24 06:17:38
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hzxizh

铁杆木虫 (正式写手)


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16楼: Originally posted by 隔岸之雨 at 2013-05-24 06:15:34
你好,测海带的蛋白质含量,冻干之后,可以直接用考马斯亮蓝G250法么?
蛋白粉加LOADING BUFFER后加热处理,再SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝或者银染,检测纯度,,
这里电泳是干什么的,,求解。。...

条件所限,电泳是来用作纯度检测的。
提醒:使用考马斯亮蓝测蛋白浓度和纯度,要注意试剂是不一样的,一个是G250,一个是R250!
18楼2013-05-24 21:54:40
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hzxizh

铁杆木虫 (正式写手)


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17楼: Originally posted by 隔岸之雨 at 2013-05-24 06:17:38
求问,冻干粉,不能直接用考马斯亮蓝测蛋白质含量么,,我测海带的, 是新鲜的海带测,还是先烘干再用考马斯亮蓝测?...

可以,测蛋白质时考马斯亮蓝和福林酚法都可,各有优缺点;之所以前边提到福林酚法,是因为2005版药典中,对多数生物制品的蛋白浓度测定要求,就是福林酚法。
个人倾向于烘干后再测。
19楼2013-05-24 22:06:23
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隔岸之雨

银虫 (小有名气)


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引用回帖:
18楼: Originally posted by hzxizh at 2013-05-24 21:54:40
条件所限,电泳是来用作纯度检测的。
提醒:使用考马斯亮蓝测蛋白浓度和纯度,要注意试剂是不一样的,一个是G250,一个是R250!...

再弱弱的问一下,那个纯度测出来的是什么,,蛋白质里面都多少是真正的蛋白质,,,?
20楼2013-05-25 05:11:47
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