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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE检测蛋白纯度
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hzxizh

铁杆木虫 (正式写手)
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scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-03 23:33:30
要测纯度，建议15%的分离胶电泳；但最好用HPLC。
要测浓度，建议BSA标定曲线，用福林酚法测定。不要有电泳估算蛋白浓度。
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11楼2010-11-03 22:45:52
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求知的学生

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hzxizh at 2010-11-03 22:45:52:
要测纯度，建议15%的分离胶电泳；但最好用HPLC。
要测浓度，建议BSA标定曲线，用福林酚法测定。不要有电泳估算蛋白浓度。

条件所限 只能用SDS-PAGE试试 多谢解答
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12楼2010-11-04 19:43:48
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hzxizh

铁杆木虫 (正式写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-05 08:39:57
既然是冻干粉，就会有些别的赋形剂或保护剂成分。实验前，一定要考虑这些物质的干扰。先搞清是什么东东，去做空白对照！
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13楼2010-11-05 07:05:22
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求知的学生

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hzxizh at 2010-11-05 07:05:22:
既然是冻干粉，就会有些别的赋形剂或保护剂成分。实验前，一定要考虑这些物质的干扰。先搞清是什么东东，去做空白对照！

多谢提醒！
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14楼2010-11-05 15:50:23
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milamiya

禁虫 (小有名气)
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15楼2012-07-13 10:25:39
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隔岸之雨

银虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by lxj341401 at 2010-11-03 14:21:56
蛋白粉加LOADING BUFFER后加热处理，再SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝或者银染，检测纯度。测浓度的话用考马斯亮蓝G250法595nm测定好了。具体操作一般的实验书上都有的。

你好，测海带的蛋白质含量，冻干之后，可以直接用考马斯亮蓝G250法么？
蛋白粉加LOADING BUFFER后加热处理，再SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝或者银染，检测纯度，，
这里电泳是干什么的，，求解。。
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16楼2013-05-24 06:15:34
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隔岸之雨

银虫 (小有名气)
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13楼: Originally posted by hzxizh at 2010-11-05 07:05:22
既然是冻干粉，就会有些别的赋形剂或保护剂成分。实验前，一定要考虑这些物质的干扰。先搞清是什么东东，去做空白对照！

求问，冻干粉，不能直接用考马斯亮蓝测蛋白质含量么，，我测海带的， 是新鲜的海带测，还是先烘干再用考马斯亮蓝测？
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17楼2013-05-24 06:17:38
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hzxizh

铁杆木虫 (正式写手)
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16楼: Originally posted by 隔岸之雨 at 2013-05-24 06:15:34
你好，测海带的蛋白质含量，冻干之后，可以直接用考马斯亮蓝G250法么？
蛋白粉加LOADING BUFFER后加热处理，再SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝或者银染，检测纯度，，
这里电泳是干什么的，，求解。。...

条件所限，电泳是来用作纯度检测的。
提醒:使用考马斯亮蓝测蛋白浓度和纯度，要注意试剂是不一样的，一个是G250，一个是R250！
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18楼2013-05-24 21:54:40
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hzxizh

铁杆木虫 (正式写手)
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引用回帖:
17楼: Originally posted by 隔岸之雨 at 2013-05-24 06:17:38
求问，冻干粉，不能直接用考马斯亮蓝测蛋白质含量么，，我测海带的， 是新鲜的海带测，还是先烘干再用考马斯亮蓝测？...

可以，测蛋白质时考马斯亮蓝和福林酚法都可，各有优缺点；之所以前边提到福林酚法，是因为2005版药典中，对多数生物制品的蛋白浓度测定要求，就是福林酚法。
个人倾向于烘干后再测。
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19楼2013-05-24 22:06:23
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隔岸之雨

银虫 (小有名气)
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18楼: Originally posted by hzxizh at 2013-05-24 21:54:40
条件所限，电泳是来用作纯度检测的。
提醒:使用考马斯亮蓝测蛋白浓度和纯度，要注意试剂是不一样的，一个是G250，一个是R250！...

再弱弱的问一下，那个纯度测出来的是什么，，蛋白质里面都多少是真正的蛋白质，，，？
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20楼2013-05-25 05:11:47
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