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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE检测蛋白纯度
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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求知的学生

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE检测蛋白纯度 已有11人参与

大家好，我现在有一些蛋白质的冻干粉，想用SDS-PAGE测一下纯度，应该如何做？胶跑完之后，该如何处理，怎么计算浓度？望不吝赐教，谢谢！
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1楼 2010-11-03 11:48:27
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先，你需要将你的蛋白溶解！然后加热处理之后电泳，电泳之后染色，通过相关仪器或者直接相机照相，利用bandscan来估计蛋白纯度！
2. 如果你想利用SDS-PAGE来测定蛋白浓度话，建议你在电泳时，在你蛋白旁边的泳道点一个BSA梯度（BSA浓度是确定的！例如你配一个0.5mg/ml），分别点1ug,2ug,4ug,6ug,8ug,10ug！电泳之后照相，利用PS，根据BSA比对的方法！首先将BSA的标准曲线做出来，然后根据你的protein的累计密度计算出他的质量，进而算出他的浓度！这种做法比一般的BSA比对方法可能更准确点！但是，利用SDS-page来测定蛋白浓度只是定性实验，如果想准确定量测定，建议你还是换bradford法或UV280等方法！

好吧，就这么多吧，希望对你有用！
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长得比我英俊的，没我有才华！有才华的，没我长得俊！
21楼2013-05-25 08:29:31
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
求知的学生(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-03 14:25:25
求知的学生(金币+1): 2010-11-03 17:11:00
蛋白粉加LOADING BUFFER后加热处理，再SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝或者银染，检测纯度。测浓度的话用考马斯亮蓝G250法595nm测定好了。具体操作一般的实验书上都有的。
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3楼2010-11-03 14:21:56
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
求知的学生(金币+1):谢谢参与
楼上说得很全了，
另外建议，
如果自己没做过，还是找个此类实验室的好。

那些试剂自己配太麻烦了。
赞一下(1人) 回复此楼
【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2010-11-03 16:10:59
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求知的学生

金虫 (小有名气)
谢谢各位的热心解答！
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5楼2010-11-03 17:12:16
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