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hflf

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求教分子高手 已有10人参与

改造一个载体,利用BamHⅠ和 XohⅠ切除中间片段,可是一直切不动,而单独用这两个酶能切动,有人说是因为这两个位点之间的距离太短(约30bp)导致双酶切难以作用。
不知道什么原因,高手解释一下,希望能给个好的建议,实验卡在这里,真是郁闷!应该不难的却搞了好长时间没进展!
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行到水穷处,坐看云起时!
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hflf

金虫 (小有名气)

不好意思,是XhoⅠ,写错了,多谢提醒
行到水穷处,坐看云起时!
2楼2010-11-01 12:37:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
那就单切呗……双酶切不动可能是buffer没配套好
你用神马公司的内切酶?
3楼2010-11-01 12:39:29
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人,我型我秀!

优秀版主

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-01 12:39:29:
那就单切呗……双酶切不动可能是buffer没配套好
你用神马公司的内切酶?

神马公司?
人生不过几十年,成败荣辱都在天,是非恩怨莫在意,健康快乐最值钱,自古人间苦无边,看得高远境如仙,愿你不为凡事恼,轻松快乐每一天。
4楼2010-11-01 12:57:09
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

楼主单酶切试试看!
jiayoubashaonian
5楼2010-11-01 13:40:53
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keyanhrc

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
若是30bp的话确实太短了。单没切吧。
6楼2010-11-01 13:47:14
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linqin1029

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
和这两个位点之间的距离太短关系不是很大,因为一般的PUC18多克隆位点上的两个酶切位点之间的距离有的比30bp还短。估计你这两个酶使用的不是公用的Buffer.
7楼2010-11-01 14:53:28
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
请问你是怎么判断双酶没有切动的,双酶作用时完全没切开?
PS:30 bp的间隔真的不短。
Thank-you,so-blue.
8楼2010-11-01 15:10:30
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):热心鼓励。 2010-11-01 18:53:25
就是,你是怎么判断双酶切是没切开那?电泳,还是神马?
按说30bp的确不断,应该是能切出来的。
还是先判断准了,确实没切开
然后:
1.是否酶失活
2.两个酶的buffer是否一样,你的酶切时候的buffer是否同时满足两个酶
3.酶切条件是否正确
4.实在不行你就单酶切,一个一个的切
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
9楼2010-11-01 15:20:56
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dhmdddd

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你判断有切开的依据是什么啊?是电泳条带还是三条?还是别的?有没有可能你已经切开了但是你中间的30bp电泳跑不出来呢?祝好运!
上班族,学习ing……
10楼2010-11-01 15:49:27
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