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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求教分子高手
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hflf

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求教分子高手 已有10人参与

改造一个载体，利用BamHⅠ和 XohⅠ切除中间片段，可是一直切不动，而单独用这两个酶能切动，有人说是因为这两个位点之间的距离太短（约30bp）导致双酶切难以作用。
不知道什么原因，高手解释一下，希望能给个好的建议，实验卡在这里，真是郁闷！应该不难的却搞了好长时间没进展！
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行到水穷处，坐看云起时！
1楼 2010-11-01 11:51:47
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hflf

金虫 (小有名气)
不好意思，是XhoⅠ，写错了，多谢提醒
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行到水穷处，坐看云起时！
2楼2010-11-01 12:37:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
那就单切呗……双酶切不动可能是buffer没配套好
你用神马公司的内切酶？
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3楼2010-11-01 12:39:29
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人，我型我秀！

优秀版主
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-01 12:39:29:
那就单切呗……双酶切不动可能是buffer没配套好
你用神马公司的内切酶？

神马公司？
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
4楼2010-11-01 12:57:09
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
楼主单酶切试试看！
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jiayoubashaonian
5楼2010-11-01 13:40:53
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keyanhrc

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
若是30bp的话确实太短了。单没切吧。
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6楼2010-11-01 13:47:14
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linqin1029

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
和这两个位点之间的距离太短关系不是很大，因为一般的PUC18多克隆位点上的两个酶切位点之间的距离有的比30bp还短。估计你这两个酶使用的不是公用的Buffer.
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7楼2010-11-01 14:53:28
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请问你是怎么判断双酶没有切动的，双酶作用时完全没切开？
PS：30 bp的间隔真的不短。
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Thank-you，so-blue.
8楼2010-11-01 15:10:30
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):热心鼓励。 2010-11-01 18:53:25
就是，你是怎么判断双酶切是没切开那？电泳，还是神马？
按说30bp的确不断，应该是能切出来的。
还是先判断准了，确实没切开
然后：
1.是否酶失活
2.两个酶的buffer是否一样，你的酶切时候的buffer是否同时满足两个酶
3.酶切条件是否正确
4.实在不行你就单酶切，一个一个的切
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
9楼2010-11-01 15:20:56
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你判断有切开的依据是什么啊？是电泳条带还是三条？还是别的？有没有可能你已经切开了但是你中间的30bp电泳跑不出来呢？祝好运！
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上班族，学习ing……
10楼2010-11-01 15:49:27
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