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hflf

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求教分子高手 已有10人参与

改造一个载体,利用BamHⅠ和 XohⅠ切除中间片段,可是一直切不动,而单独用这两个酶能切动,有人说是因为这两个位点之间的距离太短(约30bp)导致双酶切难以作用。
不知道什么原因,高手解释一下,希望能给个好的建议,实验卡在这里,真是郁闷!应该不难的却搞了好长时间没进展!
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行到水穷处,坐看云起时!
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):热心鼓励。 2010-11-01 18:53:25
就是,你是怎么判断双酶切是没切开那?电泳,还是神马?
按说30bp的确不断,应该是能切出来的。
还是先判断准了,确实没切开
然后:
1.是否酶失活
2.两个酶的buffer是否一样,你的酶切时候的buffer是否同时满足两个酶
3.酶切条件是否正确
4.实在不行你就单酶切,一个一个的切
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
9楼2010-11-01 15:20:56
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hflf

金虫 (小有名气)

不好意思,是XhoⅠ,写错了,多谢提醒
行到水穷处,坐看云起时!
2楼2010-11-01 12:37:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
那就单切呗……双酶切不动可能是buffer没配套好
你用神马公司的内切酶?
3楼2010-11-01 12:39:29
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人,我型我秀!

优秀版主

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-01 12:39:29:
那就单切呗……双酶切不动可能是buffer没配套好
你用神马公司的内切酶?

神马公司?
人生不过几十年,成败荣辱都在天,是非恩怨莫在意,健康快乐最值钱,自古人间苦无边,看得高远境如仙,愿你不为凡事恼,轻松快乐每一天。
4楼2010-11-01 12:57:09
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