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33565190

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】多糖分子量测试结果不正常 已有10人参与

我做植物多糖,采用水提醇沉法,再用SEPHAX-100分离,收集苯酚硫酸显色部分,透析、冻干。用高效凝胶色谱测试。却发现结果不如人意,主峰分子量只有几千。而我的透析膜10000以下应该是不存在的。条件与结果见附件,请高手帮忙分析下原因。

多糖分子量测定方法:高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)
仪器:Waters 600 高效液相色谱仪(配2410示差折光检测器和M32工作站)
色谱条件:
色谱柱:Ultrahydrogel™Linear 300mm×7.8mmid×2
流动相:0.1N硝酸钠
流速:0.9ml/min
柱温:45℃
样品制备:称取样品100mg于25 ml容量瓶中,用流动相溶解,定容。
分子量校正曲线所用葡聚糖标准品(均购置于sigma公司):
Dextran T-2000 (MW2000000)
DextranT-580( MW580000)
Dextran T-70 (MW70,000)
Dextran T-10 (MW10,000)
Dextran T-5  (MW2900)     
Maltaose (MW342)





2#

        Retention Time        Mn        Mw        MP        Polydispersity        Area        % Area
1        19.850        36588        39753        25394        1.086519        39355        3.65
2        22.117        2341        4670        3914        1.994919        1039324        96.35
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lyyerion

禁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
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9楼2011-05-12 10:38:18
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33565190

新虫 (初入文坛)

怎么没人回答呀! s是我发错了地方吗?
2楼2010-10-30 18:25:04
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sunny_windy110

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
感觉第一个比较弱的峰是你想要的样品,而不是第二个峰。有可能是你用的流动相不符合你的样品,可能是样品没有完全淋洗出来。按你说的,进样浓度不低。我一般都用2mg/mL。
此外,你用的是相对分子量,跟实际分子量还是有一定的偏差的。但不会有几个数量级的差异。

如果有条件,尝试换种盐,或者改变盐浓度试一下,看第一个峰的强度会不会增加。
3楼2010-10-30 20:31:25
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491468278

至尊木虫 (知名作家)

啄木鸟


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
调一下pH,如果是糖醛酸受pH的影响很大。
虫虫们,我是啄木鸟!
4楼2010-11-05 17:10:37
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