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dqvictory

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】连接产物,是否可以直接做PCR模板?已有10人参与

请教各位大侠:
    T4酶要不要先灭活其中的T4连接酶?Buffer中的离子对PCR反应有影响吗?如果需要的话,要怎样进行纯化呢?
    谢谢啦!
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼

★ ★ ★
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scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-10-27 23:10:05
理论上是可以的,只要有链接好的序列,并以此设计引物,完全没有问题;但是连接的过程会不会有杂条带或者序列的纯度等等,均会影响后面的PCR,这个问题属于验证型的,楼主自己试试不就知道可不可以了吗?不过成功了自然好,不成功的话,原因还是很多的。
严于律己,宽以待人
14楼2010-10-27 15:59:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
连接产物为什么要直接做PCR呢…………我倒是好奇这个问题
2楼2010-10-27 12:42:17
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ben1147

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-27 12:42:17:
连接产物为什么要直接做PCR呢…………我倒是好奇这个问题

估计是想看看有没有连上的,要是没连上就不做转化了,毕竟转化比较费时间,哈哈
3楼2010-10-27 12:48:30
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):good! 2010-10-27 19:56:18
PCR产物3‘是羟基,载体5’是磷酸,这个地方是连上的。PCR产物5‘是羟基,载体的3’也是羟基,这个地方应该是没连上的吧,不知道Taq酶能不能过去,我瞎猜的哈
4楼2010-10-27 12:51:26
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