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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接产物，是否可以直接做PCR模板？
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dqvictory

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】连接产物，是否可以直接做PCR模板？ 已有10人参与

请教各位大侠：
    T4酶要不要先灭活其中的T4连接酶？Buffer中的离子对PCR反应有影响吗？如果需要的话，要怎样进行纯化呢？
    谢谢啦！
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把记忆随身携带！
1楼 2010-10-27 11:56:13
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-10-27 23:10:05
理论上是可以的，只要有链接好的序列，并以此设计引物，完全没有问题；但是连接的过程会不会有杂条带或者序列的纯度等等，均会影响后面的PCR，这个问题属于验证型的，楼主自己试试不就知道可不可以了吗？不过成功了自然好，不成功的话，原因还是很多的。
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严于律己，宽以待人
14楼2010-10-27 15:59:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
连接产物为什么要直接做PCR呢…………我倒是好奇这个问题
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2楼2010-10-27 12:42:17
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-27 12:42:17:
连接产物为什么要直接做PCR呢…………我倒是好奇这个问题

估计是想看看有没有连上的，要是没连上就不做转化了，毕竟转化比较费时间，哈哈
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3楼2010-10-27 12:48:30
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):good！ 2010-10-27 19:56:18
PCR产物3‘是羟基，载体5’是磷酸，这个地方是连上的。PCR产物5‘是羟基，载体的3’也是羟基，这个地方应该是没连上的吧，不知道Taq酶能不能过去，我瞎猜的哈
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-10-27 12:51:26
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