应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家碰到过这种情况吗？
51/1返回列表
查看: 1056  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

带刀猎人

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大家碰到过这种情况吗？ 已有4人参与

今天跑的菌落PCR，跑完后竟然发现PCR管中有白色沉淀，电泳后泳道里什么都没有，这是怎么回事？我是将菌体加入到溶菌酶中37度作用40min，之后12000转离心3min，取2.5ul上清作为模板跑的PCR。
25ul PCR体系如下：
2*PCR mix                  12.5ul
溶菌酶消化上清（模板）     2.5ul
上游引物（20uM）            0.5ul  
下游引物（20uM）            0.5ul  
水                                   9ul

电泳结果，Marker旁边的紧挨着的三个空白泳道就是，前面面三个是基因组DNA PCR结果
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

希娅

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-23 20:59:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

带刀猎人

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 怎么都行 at 2010-10-23 22:23:43:
你的Buffer体系没有问题么？溶菌酶和Taq酶会不会起反应？

我大胆猜测一下，白色沉淀有可能是PCR产物析出，或者是变性的酶。
再者，你的三个空白泳道好像连引物二聚体也没有啊

建议你用TTE缓冲液(Tris,Trit ...

EDTA会不会抑制PCR反应呢？
赞一下 回复此楼
4楼2010-10-24 12:54:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

怎么都行

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-24 08:41:06
你的Buffer体系没有问题么？溶菌酶和Taq酶会不会起反应？

我大胆猜测一下，白色沉淀有可能是PCR产物析出，或者是变性的酶。
再者，你的三个空白泳道好像连引物二聚体也没有啊

建议你用TTE缓冲液(Tris,TritonX-100和EDTA)50ul，100摄氏度裂解菌体10min.离心取1ul上清做模板。或者直接挑菌落做模板。

[ Last edited by 怎么都行 on 2010-10-23 at 22:32 ]
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-10-23 22:23:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

foryever

木虫 (文坛精英)

假装忧伤的枯木桩
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
直接挑菌落做模版试试吧…
赞一下(1人) 回复此楼
　　　　　　　　　♨物是人非事事休，欲语泪先流♨
3楼2010-10-24 00:01:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

怎么都行

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 带刀猎人 at 2010-10-24 12:54:34:


EDTA会不会抑制PCR反应呢？

不会，我们一直都是这么做的，效果还可以
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-10-24 22:43:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:03 by zcl123
[考研] 321求调剂 +8 何润采123 2026-03-18 10/500 2026-03-19 16:46 by 何润采123
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +5 吃吃吃才有意义 2026-03-19 5/250 2026-03-19 16:18 by 30660438
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 287求调剂 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-19 12:32 by peike
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 0854，计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭