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caohong1115

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于测定酶活时底物转化率的问题 已有2人参与

我现在在做关于黄曲霉毒素B1的酶法转化的试验,酶活力是以底物黄曲霉毒素B1的减少量来定义的
我查看了陈石根的《酶学》,上面说,进行酶活测定时,一般是底物过量,浓度最好等于或大于100Km,且要控制反应时间,使底物的转化率占底物总量的20%以内;
另外,书上还提到,如果所选底物十分昂贵,或溶解度不允许,也可以在很低的底物浓度下作酶活力测定,如小于0.1Km的浓度

我的问题是,我现在所用的底物浓度就是小于0.1Km的,来测定我的酶的活力,我遇到的困难是,由于底物浓度很低,如果这时,我又要保证转化率小于20%,而我又是测定底物的减少来表征酶活力的,那么我的试验误差就很大。

我想知道,向我这样,选择小于0.1Km的底物浓度,进行酶活力测定时,是否可以,不用非得在底物转化率20%以内时终止反应?

希望有这方面的专家高手帮忙解答,谢谢!
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
进行酶活测定时,一般是底物过量和控制反应时间是要的,这样可以测出比较准确的反应速率。不过我还是建议你做出完整的saturation curve去算Vmax。
底物浓度就是小于0.1Km,你可以降低你的酶的用量,毕竟最后你要算的是specific activity (U/mg)
2楼2010-09-27 14:44:45
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caohong1115

铜虫 (初入文坛)

谢谢lwiaanngg  的建议!
3楼2010-09-28 14:59:22
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