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axskywings

新虫 (初入文坛)

想问下楼上用菌液PCR,引物和菌液各加多少呢?我用菌液P了一次,做了不同浓度的,没出来
11楼2010-09-28 22:10:33
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔


reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-09-30 07:18:23
条带连接前是回收过吗?回收后在连接好些,防止连上杂带,由于是TA克隆
一直向前!
12楼2010-09-29 13:59:55
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lij2

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2010-09-29 13:59:55:
条带连接前是回收过吗?回收后在连接好些,防止连上杂带,由于是TA克隆

胶回收,3000bp,就是不知道1000bp是怎么来的
13楼2010-09-29 22:20:42
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上


reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-09-30 07:19:07
lij2(金币+1): 2010-11-08 13:06:05
引用回帖:
Originally posted by axskywings at 2010-09-28 22:10:33:
想问下楼上用菌液PCR,引物和菌液各加多少呢?我用菌液P了一次,做了不同浓度的,没出来

我一般做菌落PCR,转化培养过夜。
第二天拿一个相同抗性的平板,下面垫格子纸计数。用10ul枪头挑一个克隆,先在新平板上一个小格子内划线,然后把枪头放到装有50ul水的200ul tupe里,将此tupe到PCR仪上98°处理10分钟,然后拿出吸取1ul做模板
一般做菌落或菌液pcr不怕模板少,就是模板太多引入杂质过多导致假阴性

有时候菌落小划完线枪头上看起来什么东西都没有,不过不影响,其实有菌在。
注意做正负对照
把新平板去培养,有阳性条带的就把平板上的菌摇起来抽质粒
终于熬成木虫了……
14楼2010-09-30 01:42:28
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默默的加油

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
我也出现这种情况了,3500的载体1000的片段,切完后出了个2000左右的,和一个3000多的,不知道怎么回事,胶也没问题
自天佑之吉无不利
15楼2011-05-09 11:50:18
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太极拳

木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励交流经验 2011-05-09 17:59:42
载体是新载体么?会不会是载体问题,我曾经也出现过相似的问题,后来我就把空载体啥也不连直接转化涂板,结果也长出一大堆白斑,楼主的载体会不会出问题可以鉴定一下。后来我换的新载体,PEasy-T1,双抗性的,非常好连。
16楼2011-05-09 16:48:35
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