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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】TA克隆
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axskywings

新虫 (初入文坛)
想问下楼上用菌液PCR，引物和菌液各加多少呢？我用菌液P了一次，做了不同浓度的，没出来
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11楼2010-09-28 22:10:33
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-09-30 07:18:23
条带连接前是回收过吗？回收后在连接好些，防止连上杂带，由于是TA克隆
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一直向前！
12楼2010-09-29 13:59:55
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lij2

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2010-09-29 13:59:55:
条带连接前是回收过吗？回收后在连接好些，防止连上杂带，由于是TA克隆

胶回收，3000bp，就是不知道1000bp是怎么来的
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13楼2010-09-29 22:20:42
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-09-30 07:19:07
lij2(金币+1): 2010-11-08 13:06:05
引用回帖:
Originally posted by axskywings at 2010-09-28 22:10:33:
想问下楼上用菌液PCR，引物和菌液各加多少呢？我用菌液P了一次，做了不同浓度的，没出来

我一般做菌落PCR，转化培养过夜。
第二天拿一个相同抗性的平板，下面垫格子纸计数。用10ul枪头挑一个克隆，先在新平板上一个小格子内划线，然后把枪头放到装有50ul水的200ul tupe里，将此tupe到PCR仪上98°处理10分钟，然后拿出吸取1ul做模板
一般做菌落或菌液pcr不怕模板少，就是模板太多引入杂质过多导致假阴性
，
有时候菌落小划完线枪头上看起来什么东西都没有，不过不影响，其实有菌在。
注意做正负对照
把新平板去培养，有阳性条带的就把平板上的菌摇起来抽质粒
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终于熬成木虫了……
14楼2010-09-30 01:42:28
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默默的加油

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我也出现这种情况了，3500的载体1000的片段，切完后出了个2000左右的，和一个3000多的，不知道怎么回事，胶也没问题
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自天佑之吉无不利
15楼2011-05-09 11:50:18
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太极拳

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励交流经验 2011-05-09 17:59:42
载体是新载体么？会不会是载体问题，我曾经也出现过相似的问题，后来我就把空载体啥也不连直接转化涂板，结果也长出一大堆白斑，楼主的载体会不会出问题可以鉴定一下。后来我换的新载体，PEasy-T1，双抗性的，非常好连。
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16楼2011-05-09 16:48:35
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