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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】TA克隆
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lij2

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】TA克隆 已有2人参与

我用的载体是PGM-T，3000多bp，连的也是3000多bp的一段基因，是胶回收的，没有其他片段。可是挑白色菌落提出的质粒单酶切电泳只有4000多bp。请教高人，是怎么回事啊？
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1楼 2010-09-26 17:18:43
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太极拳

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励交流经验 2011-05-09 17:59:42
载体是新载体么？会不会是载体问题，我曾经也出现过相似的问题，后来我就把空载体啥也不连直接转化涂板，结果也长出一大堆白斑，楼主的载体会不会出问题可以鉴定一下。后来我换的新载体，PEasy-T1，双抗性的，非常好连。
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16楼2011-05-09 16:48:35
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)
生物实验有时很诡异，重复次试试
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2楼2010-09-26 17:33:25
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shan-sa

金虫 (正式写手)
偶前几天刚连了个3000的，挺好滴，楼主看看单酶切的位点是不是出了问题
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4楼2010-09-26 19:57:34
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oyanxuelai

银虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-09-26 20:19:15
你那目的基因是用PCR扩出来吗?如果是的话,用tag酶扩的直接连接上载体就行;若用高保真的,则要加A尾巴,再连上载体!载体本身也可以自连.虽然做转化后长出菌,然后提质粒,再酶切,一般会出现两种情况:一种载体自连;一种是载体与目的基因连接上的.
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5楼2010-09-26 20:01:20
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