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【求助/交流】TA克隆
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lij2
金虫
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[交流]
【求助/交流】TA克隆
已有2人参与
我用的载体是PGM-T,3000多bp,连的也是3000多bp的一段基因,是胶回收的,没有其他片段。可是挑白色菌落提出的质粒单酶切电泳只有4000多bp。请教高人,是怎么回事啊?
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1楼
2010-09-26 17:18:43
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lij2
金虫
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引用回帖:
Originally posted by
zhangxn2010
at 2010-09-29 13:59:55:
条带连接前是回收过吗?回收后在连接好些,防止连上杂带,由于是TA克隆
胶回收,3000bp,就是不知道1000bp是怎么来的
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13楼
2010-09-29 22:20:42
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diaoyuhua
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性别: GG
专业: 微生物资源与分类学
生物实验有时很诡异,重复次试试
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2楼
2010-09-26 17:33:25
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shan-sa
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沙发: 1
帖子: 678
在线: 155.2小时
虫号: 848897
注册: 2009-09-16
专业: 植物病理学
偶前几天刚连了个3000的,挺好滴,楼主看看单酶切的位点是不是出了问题
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4楼
2010-09-26 19:57:34
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oyanxuelai
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性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学
★ ★
amisking(金币+2):鼓励交流! 2010-09-26 20:19:15
你那目的基因是用PCR扩出来吗?如果是的话,用tag酶扩的直接连接上载体就行;若用高保真的,则要加A尾巴,再连上载体!载体本身也可以自连.虽然做转化后长出菌,然后提质粒,再酶切,一般会出现两种情况:一种载体自连;一种是载体与目的基因连接上的.
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5楼
2010-09-26 20:01:20
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